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傳代培養(yǎng)及其操作步驟
點擊次數(shù):549 更新時間:2015-09-28

elisa試劑盒 原代細胞培養(yǎng)成功以后,需要進行分離培養(yǎng),否則細胞會因生存空間不足或密度過大,營養(yǎng)障礙,影響細胞生長。細胞由原培養(yǎng)瓶內(nèi)分離稀釋后傳到新的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)的過程稱之為傳代培養(yǎng)。傳代細胞允許培養(yǎng)的細胞擴增(形成細胞株),可以進行細胞克隆,易于保存,但可能喪失一些特殊的細胞和分化特征。傳代細胞形成細胞株的zui大利處在于提供了大量持久的實驗材料,便于實驗。
elisa試劑盒 1. 操作步驟
(1)吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液。
(2)向瓶內(nèi)加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量。以能覆蓋培養(yǎng)瓶底為宜。
(3)置37℃孵箱或室溫(25℃溫度)下進行消化,2~5min后把培養(yǎng)瓶放在倒置顯微鏡下進行觀察,當發(fā)現(xiàn)胞質(zhì)回縮、細胞間隙增大后,應(yīng)立即中止消化。
(4)吸出消化液,向瓶內(nèi)加入Hanks液少量,輕輕轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶,把殘留消化液沖掉,然后再加培養(yǎng)液。如果僅使用胰蛋白酶消化,在吸除胰蛋白液后,可直接加入少量含血清的培養(yǎng)液,終止消化。
(5)使用彎頭吸管,吸取瓶內(nèi)培養(yǎng)液,按順序反復(fù)輕輕吹打瓶壁細胞,使之從瓶壁脫離形成細胞懸液。吹打時動作要輕柔,以防用力過猛損傷細胞。
(6)用計數(shù)板計數(shù)后,分別接種于新的培養(yǎng)瓶中,置CO2培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。
(7)細胞培養(yǎng)換液時間應(yīng)根據(jù)細胞生長的狀態(tài)和實驗要求來確定。一般2~3d后應(yīng)換一次生長液。待細胞鋪滿器皿底面,即可使用;也可繼續(xù)傳代擴大培養(yǎng)或換成維持液。
2. 注意事項
(1)掌握好細胞消化的時間,消化時間過短時,細胞不宜從瓶壁脫落,過長的消化會導(dǎo)致細胞脫落、損傷。
(2)掌握好消化濃度,當消化液濃度過高時,消化時間應(yīng)縮短,過低時細胞消化時間相對延長。

elisa試劑盒 ERG/KCNH2 特異性鉀離子通道蛋白抗體
KIF4A 沉默驅(qū)動蛋白KIF4A抗體
kir 6.1 ATP敏感鉀離子通道蛋白抗體
KIAA1462 KIAA1462蛋白抗體
KIAA1549 KIAA1549蛋白抗體
KRV-VP1+KRV-VP2 (C-terminus) 基爾曼氏細小病毒VP1/VP2抗體(大鼠潛在病毒KRV)C端
KLHL20 Kelch樣蛋白20抗體
KLST 激肽釋放酶抑制劑抗體
KLHL7 kelch樣蛋白7抗體
KCNK 9 TWIK相關(guān)酸敏感鉀離子通道蛋白9抗體
KLK6 激肽釋放酶6抗體
KLK8 激肽釋放酶8抗體
KLKB1 血漿激肽釋放酶抗體
phospho-EZH2 (Thr487) 磷酸化抑癌蛋白EZH2抗體
KDM5B 組蛋白去甲基化酶JARID1B抗體

聯(lián)系人:王經(jīng)理
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