(一)基本原理

    根據(jù)HLA核苷酸堿基序列的多態(tài)性和已知的DNA序列，設計一系列等位基因型別特異性順序引物。引物的3'-端堿基根據(jù)多態(tài)性序列與其嚴格互補。因此，每一型別都具有特定的引物對相對應。通過特定的PCR反應體系擴增各等位基因的型別特異性DNA片段，產(chǎn)生相對應的特異性擴增產(chǎn)物條帶。如果是純合子，產(chǎn)生一條與特異性引物相對應的擴增帶；如果是雜合子則產(chǎn)生兩條與特異性引物對應的擴增帶。其特異性可到分辨出一個堿基的差異。擴增產(chǎn)物僅需借助常規(guī)的瓊脂糖凝膠電泳，即可根據(jù)是否存在特異性產(chǎn)物的電泳條帶直接進行HLA基因分型。elisa試劑盒

(二)方法

1．PCR-限制性片段長度多態(tài)性，RFLP)這是首先建立的對多態(tài)性進行檢測的DNA分析技術。個體間抗原特異性來自氨基酸順序的差別，后者由編碼基因的堿基順序不同所決定。這種堿基順序的差別造成限制性內(nèi)切酶識別位置及酶切位點數(shù)目的不同，從而產(chǎn)生數(shù)量和長度不一的DNA酶切片段。用特異性探針對整個基因組DNA酶切片段進行雜交，即可分析限制性長度片段多態(tài)性。該法不需探針，簡單快速，可識別單個堿基不同的序列及2個連鎖的位點。

2．PCR一序列特異性寡核苷酸探針此法用人工合成的HLA型別特異的寡核昔酸序列作為探針，與待檢細胞經(jīng)PCR擴增的HLA基因片段雜交，從而確定HLA型別，PCR技術可將HLA復合體上基因片段特異性地擴增5～6個數(shù)量級；而專門設計的SSOP又能探測出等位基因間1～2個核苷酸的差異，故PCR／SSOP技術具有靈敏度高、特異性強、需樣本量少等優(yōu)點。elisa試劑盒

3．PCR等位基因組特異性引物目前常規(guī)的HLA—DNA分型技術，包括上述的PCR／RFLP、ECR／SSOP等，zui終均需用標記的特性探針與擴增產(chǎn)物進行雜交，再分析結果。PCR／SSP方法設計出一整套等位基因組特異性引物，借助PCR技術獲得HLA型別特異的擴增產(chǎn)物，可通過電泳直接分析帶型決定HIJA型別，從而大大簡化了實驗步驟。

    由于傳統(tǒng)方法在Ⅱ類抗原分型方面困難較大，故上述幾種基因分析型方法目前主要用于Ⅱ類基因座。此外，目前已建立的HLA-NN分型技術還包括PCR單鏈構象多態(tài)性分析和PCR異源二聚體電泳多態(tài)即PCR指紋圖分析。elisa試劑盒