ELISA試劑盒

一、免疫熒光技術(shù)中標(biāo)本制作的基本程序近似于酶免疫組化，不同點如下：

1、免疫熒光不需要使用雙氧水處理，封閉和一抗孵育與其相同。

2、免疫熒光的二抗使用不同熒光標(biāo)記的二抗孵育，孵育時間根據(jù)抗體的工作濃度確定。

3、二抗孵育之后充分洗片后即可貼片、封片和觀察。

4、免疫熒光在封片時常使用封片劑或甘油：0.01M PBS （1：1）。條件許可，建議購買抗淬滅的封片液，使標(biāo)本可以保存更久。

5、熒光抗體的孵育以及后續(xù)處理需要避光。

6、熒光抗體染色假陽性可能會多，需要分別設(shè)定陽性和陰性對照。

二、注意事項

1、熒光染色后一般在1h內(nèi)完成觀察，或于4℃保存4h，時間過長，可能會使熒光提前衰退。

2、每次試驗均需設(shè)置以下三種對照：

（1） 陽性對照：陽性血清+熒光標(biāo)記物；

（2） 陰性對照：陰性血清+熒光標(biāo)記物；

（3） 熒光標(biāo)記物對照：PBS+熒光標(biāo)記物。

三、免疫熒光雙標(biāo)的經(jīng)驗之談

1、選取一抗時，要求來源于兩種不同的動物，我用的是來源于家兔和大鼠的抗體，二抗則是不同熒光信號標(biāo)記的，我用的是donkey anti-rabbit-FITC（綠）和donkey anti-rat-Tex-Red（紅）。

2、我的做法是兩種一抗同時孵育，然后兩種二抗同時孵育?？贵w濃度、孵育時間要自我摸索，我感覺一抗4℃孵育過夜比較好，背景比較清晰。

3、我的陽性對照采用的是陽性組織切片，陰性對照則分別是家兔和大鼠的IgG，熒光標(biāo)記物對照是PBS+熒光標(biāo)記物。

4、封閉血清是二抗來源動物的正常血清，我用的是10%正常donkey血清。

5、其余事項同免疫熒光單標(biāo)操作。

Acylglycerol Kinase    甘油酯激酶線粒體抗體
phospho-alpha Adducin(Ser726)    磷酸化內(nèi)收蛋白a1抗體
ATG16L2    自噬體ATG16L2蛋白抗體
ACPT    睪丸酸性磷酸酶抗體
Acid Phosphatase    酸性磷酸酶抗體
AKIP    極光激酶A相互作用蛋白1抗體
APOL6    載脂蛋白樣蛋白6抗體
ARTS    凋亡相關(guān)蛋白TGFb信號抗體
A2LD1    A2LD1蛋白抗體
A4GNT    α1,4-N-乙酰葡糖胺轉(zhuǎn)移酶α4Gn-T抗體
AADAC    芳香乙酰胺脫乙?；缚贵w
AADACL4    芳香乙酰胺脫乙?；笜拥鞍?抗體
AASDHPPT    氨基乙二酸半醛脫氫酶磷酸泛酰巰基乙胺轉(zhuǎn)移酶抗體
AASS    賴氨酸酮戊二酸還原酶抗體
ANKRD6    錨蛋白重復(fù)域6抗體
Arginase II    精氨酸酶2抗體
AKR1C3    醛固酮還原酶家族1成員C3抗體
ACTHR    促腎上腺皮質(zhì)激素受體
AGRP    褐黑素相關(guān)蛋白ART抗體
Adrenodoxin    腎上腺皮質(zhì)線粒體鐵氧還蛋白抗體
Adracalin    Allgrove綜合征相關(guān)蛋白抗體

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