人1,25二羥基維生素酶聯(lián)免疫分析試劑盒
本試劑盒僅供研究使用。ELISA試劑盒
檢測范圍：
96T
使用目的：
本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中1,25二羥基維生素D3（1,25-(OH)2D3）含量。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人 1,25二羥基維生素  D3（1,25-(OH)2D3）水平。用純化的人 1,25二羥基維生素  D3（1,25-(OH)2D3）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入 1,25二羥基維生素  D3（1,25-(OH)2D3），再與 HRP標(biāo)記的  1,25二羥基維生素  D3（1,25-(OH)2D3）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TB顯色。TB在   HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的 1,25二羥基維生素  D3（1,25-(OH)2D3）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在  450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準曲線計算樣品中人     1,25二羥基維生素D3（1,25-(OH)2D3）濃度。
標(biāo)本要求人1,25二羥基維生素酶聯(lián)免疫分析試劑盒
1．標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因   NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1.標(biāo)準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
160 ng/L
80 ng/L
40 ng/L
20 ng/L
10 ng/L
5號標(biāo)準品
4號標(biāo)準品
3號標(biāo)準品
2號標(biāo)準品
1號標(biāo)準品
150μl的原倍標(biāo)準品加入  150μl標(biāo)準品稀釋液
150μl的  5號標(biāo)準品加入  150μl標(biāo)準品稀釋液
150μl的  4號標(biāo)準品加入  150μl標(biāo)準品稀釋液
150μl的  3號標(biāo)準品加入  150μl標(biāo)準品稀釋液
150μl的  2號標(biāo)準品加入  150μl標(biāo)準品稀釋液
2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準品準確加樣 50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl（樣品zui終稀釋度為 5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。
配液：將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水  30倍稀釋后備用
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30秒后棄去，如此重復(fù) 5次，拍干。
加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外。
溫育：操作同 3。
洗滌：操作同 5。
顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10.終止：每孔加終止液    50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應(yīng)在加終止液后 15分鐘以內(nèi)進行。
操作程序總結(jié)：
計算以標(biāo)準物的濃度為橫坐標(biāo)， OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準物的濃度與  OD值計算出標(biāo)準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
注意事項人1,25二羥基維生素酶聯(lián)免疫分析試劑盒
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在 5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4．請每次測定的同時做標(biāo)準曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本  OD值大于標(biāo)準品孔*孔的 OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

ELISA試劑盒