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elisa酶聯(lián)免疫試劑盒檢測(cè)方法雙抗體夾心法
點(diǎn)擊次數(shù):638 更新時(shí)間:2017-06-23

elisa酶聯(lián)免疫試劑盒檢測(cè)方法雙抗體夾心法
雙抗體夾心法是檢測(cè)抗原zui常用的方法,操作步驟如下: 雙抗體夾心法
一、將特異性抗體與固相載體連接,形成固相抗體:洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。
二、加受檢標(biāo)本:使之與固相抗體接觸反應(yīng)一段時(shí)間,讓標(biāo)本中的抗原與固相載體上的抗體結(jié)合,形成固相抗原復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合的物質(zhì)。
三、加酶標(biāo)抗體:使固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此時(shí)固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量正相關(guān)。
四、加底物:夾心式復(fù)合物中的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進(jìn)行該抗原的定性或定量。
根據(jù)同樣原理,將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標(biāo)抗原結(jié)合物,即可用雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本中的抗體。
在臨床檢驗(yàn)中,此法適用于檢驗(yàn)各種蛋白質(zhì)等大分子抗原,例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要獲得針對(duì)受檢抗原的異性抗體,就可用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物而建立此法。如抗體的來(lái)源為抗血清,包被和酶標(biāo)用的抗體分別取自不同種屬的動(dòng)物。如應(yīng)用單克隆抗體,一般選擇兩個(gè)針對(duì)抗原上不同決定簇的單抗,分別用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物。這種雙位點(diǎn)夾心法具有很高的特異性,而且可以將受檢標(biāo)本和酶標(biāo)抗體一起保溫反應(yīng),作一步法檢測(cè)。
在一步法測(cè)定中,當(dāng)標(biāo)本中受檢抗原的含量很高時(shí),過(guò)量抗原分別和固相抗體及酶標(biāo)抗體結(jié)合,而不再形成"夾心復(fù)合物"。類同于沉淀反應(yīng)中抗原過(guò)剩的后帶現(xiàn)象,此時(shí)反應(yīng)后顯色的吸光值(位于抗原過(guò)剩帶上)與標(biāo)準(zhǔn)曲線(位于抗體過(guò)剩帶上)某一抗原濃度的吸光值相同,如按常法測(cè)讀,所得結(jié)果將低于實(shí)際的含量,這種現(xiàn)象被稱為鉤狀效應(yīng)(hook effect),因?yàn)闃?biāo)準(zhǔn)曲線到達(dá)高峰后呈鉤狀彎落。鉤狀效應(yīng)嚴(yán)重時(shí),反應(yīng)甚至可不顯色而出現(xiàn)假陰性結(jié)果。因此在使用一步法試劑測(cè)定標(biāo)本中含量可異常增高的物質(zhì)(例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等)時(shí),應(yīng)注意可測(cè)范圍的zui高值。用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應(yīng)。
elisa酶聯(lián)免疫試劑盒Homo sapiens (Human)    中性粒細(xì)胞明膠酶關(guān)聯(lián)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)    規(guī)格:    48T/96T
Mus musculus (Mouse)    中性粒細(xì)胞明膠酶關(guān)聯(lián)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)    規(guī)格:    48T/96T
Homo sapiens (Human)    中性粒細(xì)胞激活蛋白3(NAP3)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)    規(guī)格:    48T/96T
Mus musculus (Mouse)    中性粒細(xì)胞激活蛋白3(NAP3)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)    規(guī)格:    48T/96T
Rattus norvegicus (Rat)    中性粒細(xì)胞激活蛋白3(NAP3)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)    規(guī)格:    48T/96T
Homo sapiens (Human)    脂聯(lián)素(ADP)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)    規(guī)格:    48T/96T
Mus musculus (Mouse)    脂聯(lián)素(ADP)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)    規(guī)格:    48T/96T
Chicken (Gallus)    脂肪酸合酶(FASN)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)    規(guī)格:    48T/96T
Homo sapiens (Human)    脂蛋白關(guān)聯(lián)磷脂酶A2(LpPLA2)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)    規(guī)格:    48T/96T
Homo sapiens (Human)    正輔因子4(PC4)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)    規(guī)格:    48T/96T
Mus musculus (Mouse)    正輔因子4(PC4)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)    規(guī)格:    48T/96T
Rattus norvegicus (Rat)    正輔因子4(PC4)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)    規(guī)格:    48T/96T
Homo sapiens (Human)    整合素β6(ITGβ6)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)    規(guī)格:    48T/96T
Homo sapiens (Human)    粘蛋白5B(MUC5B)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)    規(guī)格:    48T/96T
Homo sapiens (Human)    粘蛋白C(MUCC)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)    規(guī)格:    48T/96T
Homo sapiens (Human)    早期B-細(xì)胞因子4(EBF4)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)    規(guī)格:    48T/96T
Mus musculus (Mouse)    早期B-細(xì)胞因子4(EBF4)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)    規(guī)格:    48T/96T
Rattus norvegicus (Rat)    早期B-細(xì)胞因子4(EBF4)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)    規(guī)格:    48T/96T
Homo sapiens (Human)    早期B-細(xì)胞因子3(EBF3)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)    規(guī)格:    48T/96T
Mus musculus (Mouse)    早期B-細(xì)胞因子3(EBF3)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)    規(guī)格:    48T/96Telisa酶聯(lián)免疫試劑盒

 

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