elisa酶聯(lián)免疫試劑盒技術(shù)及其在蛋白質(zhì)組研究中的應(yīng)用
作為后基因組時(shí)代出現(xiàn)的新興研究領(lǐng)域之一, 蛋白質(zhì)組學(xué)(proteomics)正受到越來(lái)越多的關(guān)注。 蛋白質(zhì)組學(xué)的研究目標(biāo)是對(duì)機(jī)體或細(xì)胞的所有蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定和結(jié)構(gòu)功能分析。 蛋白質(zhì)組學(xué)的研究不局限任何特定的方法。 高分辨率的蛋白質(zhì)分離技術(shù)如二維凝膠電泳和液相層析, 經(jīng)典的蛋白質(zhì)鑒定方法如氨基酸序列分析等, 現(xiàn)代質(zhì)譜技術(shù), 基因組學(xué)研究的各種手段, 現(xiàn)代計(jì)算機(jī)信息學(xué)和計(jì)算機(jī)網(wǎng)絡(luò)通訊技術(shù)等等, 任何可用于蛋白質(zhì)研究的技術(shù)手段, 蛋白質(zhì)組學(xué)都可能會(huì)采用。 它體現(xiàn)的是一個(gè)開(kāi)放的思維和研究方式。
蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)的相互作用是細(xì)胞生命活動(dòng)的基礎(chǔ)和特征。 這種千變?nèi)f化的相互作用以及由此形成的紛繁復(fù)雜的蛋白質(zhì)網(wǎng)絡(luò)同樣也是蛋白質(zhì)組學(xué)的研究?jī)?nèi)容, 相應(yīng)的工作也已經(jīng)開(kāi)展。
酵母雙雜交系統(tǒng)(yeast two-hybrid system)自建立以來(lái)已經(jīng)成為分析蛋白質(zhì)相互作用的強(qiáng)有力的方法之一。 該方法在不斷完善, 如今它不但可用來(lái)在體內(nèi)檢驗(yàn)蛋白質(zhì)間的相互作用, 而且還能用來(lái)發(fā)現(xiàn)新的作用蛋白質(zhì), 在對(duì)蛋白質(zhì)組中特定的代謝途徑中蛋白質(zhì)相互作用關(guān)系網(wǎng)絡(luò)的認(rèn)識(shí)上發(fā)揮了重要的作用。 實(shí)驗(yàn)表明雙雜交技術(shù)在蛋白質(zhì)組學(xué)上的應(yīng)用是成功的。 本文將就雙雜交技術(shù)的產(chǎn)生、發(fā)展及其在蛋白質(zhì)組研究方面的初步應(yīng)用作一介紹
一、蛋白質(zhì)組學(xué)的產(chǎn)生背景
基因組研究自從開(kāi)展以來(lái)已經(jīng)取得了舉世矚目的成就。 在過(guò)去幾年中, 已經(jīng)陸續(xù)完成了包括大腸桿菌、釀酒酵母等十多種結(jié)構(gòu)比較簡(jiǎn)單的生物的基因組DNA的全序列分析［1］。 線(xiàn)蟲(chóng)(C.elegans)的基因組DNA測(cè)序工作已基本完成［2］。 規(guī)模更為龐大的人類(lèi)基因組計(jì)劃預(yù)期在下一世紀(jì)的前幾年(2003～2005年)也將完成全部基因組DNA的序列分析。 這些進(jìn)展是非常令人振奮的。 但是也隨之產(chǎn)生了新問(wèn)題。 大量涌出的新基因數(shù)據(jù)迫使我們不得不考慮這些基因編碼的蛋白質(zhì)有什么功能這個(gè)問(wèn)題。 不僅如此, 在細(xì)胞合成蛋白質(zhì)之后, 這些蛋白質(zhì)往往還要經(jīng)歷翻譯后的加工修飾。 也就是說(shuō), 一個(gè)基因?qū)?yīng)的不是一種蛋白質(zhì)而可能是幾種甚至是數(shù)十種。 包容了數(shù)千甚至數(shù)萬(wàn)種蛋白質(zhì)的細(xì)胞是如何運(yùn)轉(zhuǎn)的？或者說(shuō)這些蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)是怎樣工作、如何相互作用、相互協(xié)調(diào)的？這些問(wèn)題遠(yuǎn)不是基因組研究所能回答得了的。 正是在此背景下, 蛋白質(zhì)組學(xué)(proteomics)應(yīng)運(yùn)而生。
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