試管法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度

1.配制工作液:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品數(shù)量，按 50 體積試劑 A，1 體積試劑 B 配制適量 BCA 工作液，充分混勻。工作液配制的量要與測(cè)定所用的比色杯對(duì)應(yīng)。每個(gè)測(cè)定要做 2~3 個(gè)平行。本處列舉的比色體系所用的是 0.5 mL 的比色杯。如比色杯規(guī)格不同，體系需要放大到實(shí)驗(yàn)將采用的比色杯準(zhǔn)確讀數(shù)所需要的體積。

2.BSA 標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的準(zhǔn)備:樣品用水或其它不干擾顯色反應(yīng)的緩沖液配制，使待測(cè)定的濃度位于標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性部分。每個(gè)反應(yīng)準(zhǔn)備 3 個(gè)平行測(cè)定。標(biāo)準(zhǔn)曲線一般 5~6 個(gè)點(diǎn)即可。根據(jù)樣品的估測(cè)濃度確定各點(diǎn)的具體濃度。稀釋 BSA 時(shí)可以用水或與樣品一致的溶液。如待測(cè)樣品的濃度約為 200 μg/mL，可按下表的次序加入 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品、樣品及 BCA 工作液。

3.取適量體積的標(biāo)準(zhǔn)蛋白，以蛋白液:工作液=1:20 的比例混勻。37 ℃ 溫浴 30 min。冷卻至室溫。

4.將樣品與標(biāo)準(zhǔn)品在 562 nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度。