植物維生素D(VD)elisa檢測試劑盒操作步驟:
1.編號:將樣品對應(yīng)微孔按序編號,每板應(yīng)設(shè)陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)
2.加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50μl。然后在待測樣品孔先 加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,
3.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用。
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此 重復 5 次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。
7.溫育:操作同 3。
8.洗滌:操作同 5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10 分鐘.
10.終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進行。
植物維生素D(VD)elisa檢測試劑盒 注意事項:
1)試劑應(yīng)按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄,不可保存。
2)實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
3)不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
4)使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
5)使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6)洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水。