原代細(xì)胞(primary culture cell)是指從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞。有人把培養(yǎng)的第1代細(xì)胞與傳10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。原代細(xì)胞不僅廣泛應(yīng)用于分子、細(xì)胞生物學(xué)和生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究，如蛋白質(zhì)組學(xué)、基因組學(xué)、細(xì)胞株(系)研究、DNA，RNA和遺傳學(xué)研究等。
 

　　一、凍存原代細(xì)胞的培養(yǎng)：
 

　　1.將一管細(xì)胞從液氮罐中取出，注意保護(hù)手和眼睛。
 

　　2.將凍存管快速的放入37℃水浴中，輕輕握住并旋轉(zhuǎn)，直到管內(nèi)物體*融化。
 

　　3.將凍存管立即從水浴中拿出，擦干，轉(zhuǎn)入無菌環(huán)境。
 

　　4.用70%的酒精沖洗凍存管，然后擦去多余酒精。
 

　　5.打開蓋子，注意手指不要碰到里面的螺紋(注意，由于凍存管有負(fù)壓，開蓋時可能會有少量溢出，這是正?，F(xiàn)象)。
 

　　6.用多聚賴氨酸包被培養(yǎng)瓶。多數(shù)細(xì)胞推薦的接種密度為每平方厘米5000個細(xì)胞。
 

　　7.蓋好培養(yǎng)瓶的蓋子，輕輕搖晃培養(yǎng)瓶以使細(xì)胞分布均勻。若需要?dú)怏w交換可打開蓋子。
 

　　8.將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱中。
 

　　9.放入培養(yǎng)箱后第6-16小時更換一次培養(yǎng)基，以去除殘留的二甲基亞楓和未貼壁的細(xì)胞。
 

　　二、原代細(xì)胞的組織塊培養(yǎng)法：
 

　　1.組織塊接種后的前3天，在觀察和移動的過程中，注意不要引起液體的振蕩。要避免經(jīng)常翻動和振動，否則組織塊不易附著于瓶壁上或附著后也會脫落飄起。
 

　　2.加入的培養(yǎng)液不宜過多，避免浸泡的組織塊受輕微的波動而脫落下來。
 

　　3.當(dāng)細(xì)胞向外遷徙出來后要注意記錄并去除漂浮的組織塊和殘留的細(xì)胞，它們產(chǎn)生的有毒物質(zhì)會影響原代細(xì)胞的生長。
 

　　4.為促進(jìn)組織塊盡快粘貼在培養(yǎng)瓶皿上，可以在種植前先將膠原薄層涂在培養(yǎng)瓶底壁上。