實時熒光定量PCR檢測內(nèi)容簡述
點擊次數(shù):347 更新時間:2023-05-23
實時熒光定量PCR技術(shù)(Real-time quantitative PCR),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基因,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
熒光定量PCR以其特異性強、靈敏度高、重復性好、定量準確、速度快、全封閉反應(yīng)等優(yōu)點成為了分子生物學研究中的重要工具,目前已得到廣泛應(yīng)用(如轉(zhuǎn)基因動植物檢測、RNAi基因失活率檢測、病原微生物或病毒含量檢測、基因差異表達、基因分型)。
qPCR檢測內(nèi)容:
1、 根據(jù)目的基因設(shè)計引物及引物合成
2、RNA抽提+逆轉(zhuǎn)錄
3、 RNA定量及質(zhì)量分析
4、使用熒光染料SYBR Green法進行實時定量PCR(重復三次)
5、 數(shù)據(jù)處理