操作步驟: 1:樣品準備:取1毫升細胞培養(yǎng)上清(貼壁和懸浮細胞都可以 已培養(yǎng)48小時以上),在16000g離心5分鐘,小心棄去上清,避免丟失沉淀(沉淀量有可能很少,目視看不到)。將沉淀用無菌PBS重懸,在16000g離心5分鐘,同樣小心棄去上清,如此反復用無菌PBS洗三次 將獲得的沉淀用100微升超純水重懸,置于100℃水浴中孵育5分鐘。如此制備好的樣品可在4℃保存1到2個月。 2:PCR反應的準備: 待各組份融化后先瞬時離心,然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應體系,每次實驗需加一個陰性和一個陽性對照,測試反應管可以有多個。配制過程中應注意無菌,并注意避免操作產(chǎn)生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染,推薦在有風壓的設備如超凈臺或生物安全柜中進行操作。建議配制完畢后瞬時離心以使液體沉至管底。 服務流程: 接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結果交付——售后服務。 產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 | 阿馬帕里病毒RT-LAMP試劑盒說明書 | RT-LAMP kit for amapari virus | BJ-P987457 |
它具有下列特點: 1. 即開即用,用戶只需要提供 DNA 模板。 2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化,專一性強,只擴增鮑皰疹樣病毒,與其他植物沒有交叉反應。 3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。 4. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。 5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次,但只能用于科研。 ? 使用及效果: PCR反應特點 (1) 特異性強 PCR反應的特異性決定因素為: ①引物與模板DNA特異正確的結合; ②堿基配對原則; ③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性; ④靶基因的特異性與保守性。 其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。 (2) 靈敏度高 PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。 (3) 簡便、快速 PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。 (4) 對標本的純度要求低 不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論。 儲存條件: 僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法 1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。 2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。 3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。 5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 PCR實驗方法步驟: 方法 1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5 μl dNTP mix (2mM) 4 μl 引物1(10pM) 2 μl 引物2(10pM) 2 μl Taq酶 (2U/μl) 1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2:調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。 3:結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μl進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。 1g微黃綠鏈霉菌Human IGF2BP2(insulin-like growth factor 2 mRNA binding protein 2) ELISA Kit 250mg炭黑曲霉Human IGF2BP1(Insulin-like growth factor 2 mRNA-binding protein 1) ELISA Kit 1g多產(chǎn)色鏈霉菌Human IMP5 ELISA Kit 5g喬木鏈格孢Human IGHD ELISA Kit 500mg污黑腐皮殼Human IGKV1-5 ELISA Kit 50mg樹舌Human IGSF8 ELISA Kit 1g米根霉Human IGSF11 ELISA Kit 250mg藍微褐鏈霉菌Human IGSF21 ELISA Kit 5g膠孢Human IKZF3 ELISA Kit 5mg孢木霉Human IMMP2L(Mitochondrial inner membrane protease subunit 2) ELISA Kit 25g長孺孢Human ILKAP ELISA Kit 5g灰色產(chǎn)色鏈霉菌Human IFT81 ELISA Kit 1g星孢毛銹傘Human IFIT3 ELISA Kit 1g鏈格孢Human IFT88 ELISA Kit 1g固氮菌Human IFT52 ELISA Kit 5g谷氨酸棒桿菌Human IFT43 ELISA Kit 25g紅緣層孔菌Human IFT57 ELISA Kit 阿馬帕里病毒RT-LAMP試劑盒說明書Candida Elective瓊脂星形細胞生長添加物外周血白細胞AVPR2(arginine vasopressin receptor 2) 精氨酸加壓素受體2抗原 DTM培養(yǎng)基基礎心肌細胞生長添加物上皮細胞Aurora B 極光激酶B抗原 DRBC培養(yǎng)基角臘上皮細胞生長添加物成纖維細胞Nociceptin 孤菲肽(痛敏肽)(抗原) WORT瓊脂基礎滋養(yǎng)層細胞生長添加物前列腺上皮細胞B7-H1/PDL1/CD274(programmed death ligand 1) 程序性死亡配體1(多肽) WORT肉湯基礎前脂肪細胞分化生長添加物胰島β細胞Nociceptin receptor 孤菲肽受體(痛敏肽受體)(抗原) BIGGY瓊脂前脂肪細胞生長添加物前列腺平滑肌細胞Nogo-A 軸索過度生長抑制因子-A(抗原) YGC瓊脂脂肪細胞生長添加物前列腺成纖維細胞Nogo-66 1-40 Nogo-66 (1-40) 改良綠色酵母菌和真菌肉湯卵巢上皮細胞生長添加物甲狀腺濾泡上皮細胞Nogo R 軸索過度生長抑制因子受體(多肽抗原) |