它具有下列特點: 1. 即開即用,用戶只需要提供 DNA 模板。 2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化,專一性強,只擴增鮑皰疹樣病毒,與其他植物沒有交叉反應(yīng)。 3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。 4. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。 5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次,但只能用于科研。 服務(wù)流程: 接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。 產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 | 登革病毒通用RT-LAMP試劑盒圖片 | Universal RT-LAMP kit for dengue virus | BJ-P987781 |
? 使用及效果: PCR反應(yīng)特點 (1) 特異性強 PCR反應(yīng)的特異性決定因素為: ①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合; ②堿基配對原則; ③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性; ④靶基因的特異性與保守性。 其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。 (2) 靈敏度高 PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌。 (3) 簡便、快速 PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。 (4) 對標(biāo)本的純度要求低 不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。 儲存條件: 僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法 1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。 2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。 3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。 5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 PCR實驗方法步驟: 方法 1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5 μl dNTP mix (2mM) 4 μl 引物1(10pM) 2 μl 引物2(10pM) 2 μl Taq酶 (2U/μl) 1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。 3:結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。 5g蘇云金芽孢桿菌蠟螟亞種Human SH3GL2 ELISA Kit 1g枯草芽孢桿菌Human SH3PXD2A ELISA Kit 250mg石楠炭疽病菌Human SHARPIN(Sharpin) ELISA Kit 5g白假絲酵母Human SHD ELISA Kit 25g蠟樣芽胞桿菌Human SHC ELISA Kit 5g黑曲霉Human MUC20(Mucin-20) ELISA Kit 50g三葉草根瘤菌Human SHE ELISA Kit 25g灰肉色鏈霉菌Human SH3PXD2A ELISA Kit 5g桑帕約氏酵母Human SH3GL3 ELISA Kit 1g屎腸球菌Human HAAO(3-hydroxyanthranilate 3,4-dioxygenase) ELISA Kit 25g蛹蟲草*Human SH2D4A ELISA Kit 5g鞘氨盒菌屬Human SH3BGR ELISA Kit 1g巨型艾美耳球蟲Human SH2D5 ELISA Kit 5g葡萄座腔菌Human SH3BGRL2(SH3 Domain Binding Glutamate Rich Protein Like 2 ) ELISA Kit 250g金龜子綠僵菌小孢變種Human SH3BGRL3(SH3 domain-binding glutamic acid-rich-like protein 3) ELISA Kit 100g栗疫菌Human SH3BP1 ELISA Kit 25g魯杰氏菌Human SH2D2A ELISA Kit 登革病毒通用RT-LAMP試劑盒圖片LIR-8/CD85c/LILRB5 白細(xì)胞免疫球蛋白樣受體8抗體美他環(huán)素2,4-吡啶二羧酸Human P-PKC (Phospho Protein Kinase C) ELISA Kit LIS1 無腦回的致病基因LIS1抗體頭孢呋辛酯2,4-吡啶二羧酸Human pIκBα (Phospho-Inhibitory Subunit of NF Kappa B Alpha) ELISA Kit LILRB3/CD85a/PirB 白細(xì)胞免疫球蛋白樣受體-B抗體頭孢地尼硫氫化,水合Human pERK ( Phospho Extracellular Signal Regulated Kinase) ELISA Kit LIX1 LIX1抗體頭孢克肟氯亞鉑酸Human A-CoA (Acetyl Coenzyme A) ELISA Kit Livin 凋亡抑制蛋白抗體美羅培南氯亞鉑酸Human PI3K (Phosphoinositide-3-Kinase) ELISA Kit phospho-LKB1(Thr363) 磷酸化絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶抗體氨曲南2-溴異丁酰溴Human PGM (Phosphoglucomutase) ELISA Kit phospho-LKB1(Ser334) 磷酸化絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶抗體頭孢米諾2-溴異丁酰溴Human PCK1 (Phosphoenolpyruvate Carboxykinase 1) ELISA Kit phospho-LKB1(Ser428) 磷酸化絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶抗體鹽酸阿霉素2-溴異丁酰溴Human PLAA (Phospholipase A2 Activating Protein) ELISA Kit 操作步驟: 1:樣品準(zhǔn)備:取1毫升細(xì)胞培養(yǎng)上清(貼壁和懸浮細(xì)胞都可以 已培養(yǎng)48小時以上),在16000g離心5分鐘,小心棄去上清,避免丟失沉淀(沉淀量有可能很少,目視看不到)。將沉淀用無菌PBS重懸,在16000g離心5分鐘,同樣小心棄去上清,如此反復(fù)用無菌PBS洗三次 將獲得的沉淀用100微升超純水重懸,置于100℃水浴中孵育5分鐘。如此制備好的樣品可在4℃保存1到2個月。 2:PCR反應(yīng)的準(zhǔn)備: 待各組份融化后先瞬時離心,然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應(yīng)體系,每次實驗需加一個陰性和一個陽性對照,測試反應(yīng)管可以有多個。配制過程中應(yīng)注意無菌,并注意避免操作產(chǎn)生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染,推薦在有風(fēng)壓的設(shè)備如超凈臺或生物安全柜中進(jìn)行操作。建議配制完畢后瞬時離心以使液體沉至管底。 |