PCR反應(yīng)五要素: 參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 引物: 引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。 設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則: ①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。 ②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。 ③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。 ④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3’端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。 ⑤引物3’端的堿基,特別是zui末及倒數(shù)*個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。 ⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn),被擴(kuò)增的靶序列zui有適宜的酶切位點(diǎn),這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。 ⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。 參數(shù)規(guī)格: 產(chǎn)品名稱:念珠菌通用LAMP試劑盒圖片 英文名稱:Universal lamp kit for Candida 貨號(hào):BJ-P987656 產(chǎn)品規(guī)格:50T 分類:熒光定量PCR試劑盒 儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。 運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門。 產(chǎn)品特點(diǎn): 本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測(cè)試劑盒 。? 產(chǎn)品特點(diǎn): ◇高特異性:與其他病毒無(wú)交叉反應(yīng),無(wú)非特異性擴(kuò)增; ◇高靈敏度:檢測(cè)靈敏度可達(dá)10~100拷貝; ◇操作簡(jiǎn)便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測(cè); ◇高通量:多種雙重PCR檢測(cè)以及三重PCR檢測(cè)試劑盒。 樣品要求及注意事項(xiàng): 1、 如果提供實(shí)驗(yàn)材料,實(shí)驗(yàn)材料必須保證新鮮,請(qǐng)您采樣后立刻放入液氮中速凍或加入樣穩(wěn)定劑,并用干冰運(yùn)輸。 2、 如果樣品可以用Trigol法提總RNA ,也可以將樣品研磨后放在 Trigol中,動(dòng)植物組織 : 50~100mg/mlTrigol,貼壁細(xì)胞:10cm2/mlTrigol,懸浮細(xì)胞:5×106動(dòng)植物,酵母細(xì)胞或細(xì)菌細(xì)胞10×107/mlTrigol。 3、 如果提供RNA或cDNA我們要對(duì)您提供的材料進(jìn)行評(píng)估。 4、 實(shí)時(shí)熒光定量PCR服務(wù)您一定要提供樣品及要擴(kuò)增基因的詳細(xì)信息。 儲(chǔ)存條件: 14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法 1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。 2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。 3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。 5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 使用方法: 一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。 1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。 2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,*用帶芯槍頭,下同)。 3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 陽(yáng)性對(duì)照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。 4. 換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。 5. 換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。 6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。 二、樣品 DNA 的制備 7. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產(chǎn)品跟市場(chǎng)上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。 8. 如果有 N 個(gè)樣品,則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取,多出的一個(gè)用作樣品制備陽(yáng)性對(duì)照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管。 三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行) 9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用水做模板),6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用水做模板),1 個(gè)用于PCR 陽(yáng)性對(duì)照。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 250mg枯草芽孢桿菌Human MCF2L (Guanine nucleotide exchange factor DBS) ELISA KIT 1g米曲霉Human RPIA(Ribose-5-phosphate isomerase) ELISA Kit 5g巨型艾美耳球蟲Human MXI1 (Max-interacting protein 1) ELISA KIT 1g耐輻射奇球菌Human MTCP1 (Protein p13 MTCP-1) ELISA KIT 25g云南紅球菌屬Human MECOM (MDS1 and EVI1 complex locus protein EVI1) ELISA KIT 5g枯草芽孢桿菌Human ACADM (Medium-chain specific acyl-CoA dehydrogenase, mitochondrial) ELISA KIT 25g食油假單胞菌Human MKKS (McKusick-Kaufman/Bardet-Biedl syndromes putative chaperonin) ELISA KIT 5g葉點(diǎn)霉Human MC1R (Melanocyte-stimulating hormone receptor) ELISA KIT 500g青霉Human PRF1(Perforin-1) ELISA Kit 1g蘇云金芽孢桿菌Human MAMDC4 (Apical endosomal glycoprotein) ELISA KIT 5g中慢生根瘤菌Human MB21D2 (Protein MB21D2) ELISA KIT 1mg大橋村鹽單胞菌Human MDGA1 (MAM domain-containing glycosylphosphatidylinositol anchor protein 1) ELISA KIT 5mg大腸埃希氏桿菌Human M6PR (Cation-dependent mannose-6-phosphate receptor) ELISA KIT 25g香菇11Human MARCO (Macrophage receptor MARCO) ELISA KIT 5g加利福尼亞擬威爾酵母Human MLIP (Muscular LMNA-interacting protein) ELISA KIT 1g類干酪乳桿菌Human MST1R(Macrophage-stimulating protein receptor) ELISA Kit 1g灰黃青霉Human MSC(Musculin) ELISA Kit 念珠菌通用LAMP試劑盒圖片CXCR1/IL-8RA 細(xì)胞表面趨化因子受體1抗體人參皂苷Rg3PrucaloprideHuman BRCA1 (Breast Cancer Susceptibility Protein 1) ELISA Kit CXCR2/CD182 細(xì)胞表面趨化因子受體2抗體苦參堿6,7-二甲氧乙氧基喹唑啉-4-酮Human BRCA2 (Breast Cancer Susceptibility Protein 2) ELISA Kit CX3CL1 CX3CL1抗體鵝去氧膽酸3,6-二溴噠Human BCAN (Brevican) ELISA Kit CX3CR1 趨化因子受體1抗體天麻素3,6-二溴噠Human MT1M (Metallothionein 1M) ELISA Kit CXorf36 脫羧酶蛋白體36抗體梓Tris(6,6,7,7,8,8,8-heptafluoro-2,2-dimethyl-3,5-octanedionate)erbium(III),Er(FOD)3Human βTG (Thromboglobulin, Beta) ELISA Kit CXorf36 脫羧酶蛋白體36抗體原兒茶酸Tris(6,6,7,7,8,8,8-heptafluoro-2,2-dimethyl-3,5-octanedionate)erbium(III),Er(FOD)3Human MT3 (Metallothionein 3) ELISA Kit Cyclin A 周期素A抗體原兒茶1,2-二(二甲硅基)苯Human CNP (C-type Natriuretic Peptide) ELISA Kit Cyclin B1 周期素B1抗體血竭素高氯酸鹽1,2-二(二甲硅基)苯Human C1q-Ab (Anti-Complement 1q Antibody) ELISA Kit 注意事項(xiàng): 1. 建議使用新鮮采取的動(dòng)物組織,若為長(zhǎng)期冷凍組織,應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融,否則會(huì)導(dǎo)致模板的降解,影響PCR效率。 2. 試劑Buffer AL若低溫保存,易產(chǎn)生沉淀。在使用前務(wù)必將其在室溫中放置一段時(shí)間,也可在37℃水浴中預(yù)熱10 min,以溶解沉淀,混勻后再使用。 3. 電泳檢測(cè)時(shí),切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否則,電泳時(shí)會(huì)在泳道中出現(xiàn)一大團(tuán)拖尾亮帶,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 4. 建議擴(kuò)增片段長(zhǎng)度1 kb以內(nèi),以便擴(kuò)增效率佳。 5. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。 |