參數(shù)規(guī)格: 產(chǎn)品名稱(chēng):吉氏巴貝斯蟲(chóng)LAMP試劑盒 英文名稱(chēng):Lamp kit for Babesia Gilbert 貨號(hào):BJ-P987534 產(chǎn)品規(guī)格:50T 分類(lèi):熒光定量PCR試劑盒 儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。 運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門(mén)。 產(chǎn)品特點(diǎn): 本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開(kāi)發(fā)的高靈敏 PCR檢測(cè)試劑盒 。? 產(chǎn)品特點(diǎn): ◇高特異性:與其他病毒無(wú)交叉反應(yīng),無(wú)非特異性擴(kuò)增; ◇高靈敏度:檢測(cè)靈敏度可達(dá)10~100拷貝; ◇操作簡(jiǎn)便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測(cè); ◇高通量:多種雙重PCR檢測(cè)以及三重PCR檢測(cè)試劑盒。 樣品要求及注意事項(xiàng): 1、 如果提供實(shí)驗(yàn)材料,實(shí)驗(yàn)材料必須保證新鮮,請(qǐng)您采樣后立刻放入液氮中速凍或加入樣穩(wěn)定劑,并用干冰運(yùn)輸。 2、 如果樣品可以用Trigol法提總RNA ,也可以將樣品研磨后放在 Trigol中,動(dòng)植物組織 : 50~100mg/mlTrigol,貼壁細(xì)胞:10cm2/mlTrigol,懸浮細(xì)胞:5×106動(dòng)植物,酵母細(xì)胞或細(xì)菌細(xì)胞10×107/mlTrigol。 3、 如果提供RNA或cDNA我們要對(duì)您提供的材料進(jìn)行評(píng)估。 4、 實(shí)時(shí)熒光定量PCR服務(wù)您一定要提供樣品及要擴(kuò)增基因的詳細(xì)信息。 儲(chǔ)存條件: 14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法 1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。 2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。 3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。 5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 使用方法: 一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。 1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。 2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,*用帶芯槍頭,下同)。 3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 陽(yáng)性對(duì)照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。 4. 換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。 5. 換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。 6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。 二、樣品 DNA 的制備 7. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產(chǎn)品跟市場(chǎng)上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。 8. 如果有 N 個(gè)樣品,則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取,多出的一個(gè)用作樣品制備陽(yáng)性對(duì)照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管。 三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行) 9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用水做模板),6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用水做模板),1 個(gè)用于PCR 陽(yáng)性對(duì)照。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! PCR反應(yīng)五要素: 參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 引物: 引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。 設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則: ①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。 ②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。 ③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。 ④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3’端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。 ⑤引物3’端的堿基,特別是zui末及倒數(shù)*個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。 ⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn),被擴(kuò)增的靶序列zui有適宜的酶切位點(diǎn),這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。 ⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。 1g微白類(lèi)諾卡氏菌Human TXB2(Thromboxane B2) ELISA Kit 25g凱斯特鞘氨單胞菌Human OT(Oxytocin) ELISA Kit 5g尖角凸臍蠕孢Human KYN(Kynurenine) ELISA Kit 1g薔薇生鏈格孢Human RFC1(Reduced Folate Carrier 1) ELISA Kit 5g假單胞菌屬Human Acetylated p53(Acetylated p53) ELISA Kit 1gMicroterricola viridariiHuman Cleaved CASP9(Cleaved Caspase-9) ELISA Kit 5g蘇云金芽孢桿菌Human Cleaved CASP8(Cleaved Caspase-8) ELISA Kit 1g膠孢Human Rbx2(RNF7) ELISA Kit 100g刺孢吸水鏈霉菌昆明變種Human FBLN3(Fibulin-3) ELISA Kit 25gpYES3/CTHuman Anti-tissue transglutaminase IgG(Anti-tissue transglutaminase IgG) ELISA Kit 5g青霉(加詞待譯)Human Ig(Immunoglobulin) ELISA Kit 1g纖維纖維微菌Human Cleaved BID/TBID(Cleaved BH3-interacting domain death agonist) ELISA Kit 5g冷溫木拉克酵母Human GABPA(GA-binding protein alpha chain) ELISA Kit 1g斯氏土地桿菌Human GABP1(GA-binding protein subunit beta-1) ELISA Kit 250mg大腸埃希氏菌Human Anti-DSG3 antibody(anti-Desmoglein-3 antibody) ELISA Kit 100g弗雷德里克斯堡假單胞菌Human 5-MTHF(5-Methyltetrahydrofolate) ELISA Kit 25g克魯斯假絲酵母Human ILK-1(Integrin-Linked Kinase 1) ELISA Kit 吉氏巴貝斯蟲(chóng)LAMP試劑盒葡萄糖胰蛋白胨瓊脂 (CM0075)水楊苷2,4-二氟苯甲酸NR2C/NMDAR2C(N-Methyl-d-Asprtate receptor 2C) 谷氨酸受體2C(多肽) Liver Broth 肝肉湯水飛薊賓2,4-二氟苯甲酸N-ras 原癌基因抗原 庖肉培養(yǎng)基 (CM0081)蕓香柚皮苷2,4-二氟苯甲酸Nrf2 peptide 核因子2相關(guān)因子2抗原 Hoyle培養(yǎng)基基礎(chǔ) (CM0083)芍藥苷2,2-二氟-1,3-苯并二惡茂NRF-1(nuclear respiratory factor-1) 核呼吸因子-1抗原 甘露糖鹽瓊脂 (Chapman 培養(yǎng)基) (CM0085)鼠李糖2,2-二氟-1,3-苯并二惡茂NSE (neuron specific enolase) 神經(jīng)元特異性烯醇化酶抗原 胰蛋白胨水 Tryptone Water(CM0087)甜菜堿3-氟鄰苯二甲酸NTCP(Na+/taurocholate Cotransporting Polypeptide) 鈉離子/牛磺膽酸共轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗原 鹽肉肉湯 (CM0094)鹽酸甜菜堿3-氟鄰苯二甲酸Ghrelin 28 腦腸肽28 Czapek Dox 液體培養(yǎng)基 (CM0095)甜菊苷1-Boc-4-溴甲基哌啶OCLN(Occluding) 咬合蛋白抗原 注意事項(xiàng): 1. 建議使用新鮮采取的動(dòng)物組織,若為長(zhǎng)期冷凍組織,應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融,否則會(huì)導(dǎo)致模板的降解,影響PCR效率。 2. 試劑Buffer AL若低溫保存,易產(chǎn)生沉淀。在使用前務(wù)必將其在室溫中放置一段時(shí)間,也可在37℃水浴中預(yù)熱10 min,以溶解沉淀,混勻后再使用。 3. 電泳檢測(cè)時(shí),切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否則,電泳時(shí)會(huì)在泳道中出現(xiàn)一大團(tuán)拖尾亮帶,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 4. 建議擴(kuò)增片段長(zhǎng)度1 kb以?xún)?nèi),以便擴(kuò)增效率佳。 5. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。 |