操作步驟: 1:樣品準(zhǔn)備:取1毫升細(xì)胞培養(yǎng)上清(貼壁和懸浮細(xì)胞都可以 已培養(yǎng)48小時(shí)以上),在16000g離心5分鐘,小心棄去上清,避免丟失沉淀(沉淀量有可能很少,目視看不到)。將沉淀用無(wú)菌PBS重懸,在16000g離心5分鐘,同樣小心棄去上清,如此反復(fù)用無(wú)菌PBS洗三次 將獲得的沉淀用100微升超純水重懸,置于100℃水浴中孵育5分鐘。如此制備好的樣品可在4℃保存1到2個(gè)月。 2:PCR反應(yīng)的準(zhǔn)備: 待各組份融化后先瞬時(shí)離心,然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應(yīng)體系,每次實(shí)驗(yàn)需加一個(gè)陰性和一個(gè)陽(yáng)性對(duì)照,測(cè)試反應(yīng)管可以有多個(gè)。配制過程中應(yīng)注意無(wú)菌,并注意避免操作產(chǎn)生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染,推薦在有風(fēng)壓的設(shè)備如超凈臺(tái)或生物安全柜中進(jìn)行操作。建議配制完畢后瞬時(shí)離心以使液體沉至管底。 服務(wù)流程: 接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。 產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號(hào) | 牛腸杯狀病毒RT-LAMP試劑盒 | RT-LAMP kit for bovine enterocalicivirus | BJ-P987590 |
它具有下列特點(diǎn): 1. 即開即用,用戶只需要提供 DNA 模板。 2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化,專一性強(qiáng),只擴(kuò)增鮑皰疹樣病毒,與其他植物沒有交叉反應(yīng)。 3. 提供陽(yáng)性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。 4. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。 5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次,但只能用于科研。 ? 使用及效果: PCR反應(yīng)特點(diǎn) (1) 特異性強(qiáng) PCR反應(yīng)的特異性決定因素為: ①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合; ②堿基配對(duì)原則; ③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性; ④靶基因的特異性與保守性。 其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。 (2) 靈敏度高 PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測(cè)中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。 (3) 簡(jiǎn)便、快速 PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無(wú)放射性污染、易推廣。 (4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低 不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。 儲(chǔ)存條件: 僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法 1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。 2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。 3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。 5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟: 方法 1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5 μl dNTP mix (2mM) 4 μl 引物1(10pM) 2 μl 引物2(10pM) 2 μl Taq酶 (2U/μl) 1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。 2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。 3:結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。 4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。 1g黑曲霉Human HSD17B10(3-hydroxyacyl-CoA dehydrogenase type-2) ELISA Kit 25g葡萄座腔菌Human RAB10(Ras-related protein Rab-10) ELISA Kit 5g芽孢桿菌屬Human LILRB4(Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 4) ELISA Kit 1g短芽孢桿菌Human PPP1R14B(Protein phosphatase 1 regulatory subunit 14B) ELISA Kit 250mg仙臺(tái)鏈霉菌Human LPPR4(Lipid phosphate phosphatase-related protein type 4) ELISA Kit 5g阪崎克羅諾桿菌Human NBR1(Next to BRCA1 gene 1 protein) ELISA Kit 1g類干酪乳桿菌Human TTF2(Transcription termination factor 2) ELISA Kit 5g新瀉氨基桿菌Human TCF7L2(Transcription factor 7-like 2) ELISA Kit 1g蠟狀芽孢桿菌Human KCNJ10(ATP-sensitive inward rectifier potassium channel 10) ELISA Kit 25gNCI-H1563(人胚肺細(xì)胞)Human TBX21(T-box transcription factor TBX21) ELISA Kit 5g公牛鏈霉菌Human DKKL1(Dickkopf-like protein 1) ELISA Kit 100ml釀酒酵母Human C1orf106(Uncharacterized protein C1orf106) ELISA Kit 25ml島生異擔(dān)子菌Human TRIM22(E3 ubiquitin-protein ligase TRIM22) ELISA Kit 500ml抑制暗棕色桿菌Human PRSS22(Brain-specific serine protease 4) ELISA Kit 25gSphingomonasHuman B7H6(B7 homolog 6) ELISA Kit 5g根瘤菌Human WNT10A(Protein Wnt-10a) ELISA Kit 5g灰平鏈霉菌Human RGS19(Regulator of G-protein signaling 19) ELISA Kit 牛腸杯狀病毒RT-LAMP試劑盒Phospho-BLNK(Tyr96) 磷酸化T淋巴細(xì)胞連接蛋白抗體鹽酸咪三氯化金溶液Metronidazole/BSA 甲硝唑偶聯(lián)牛血清白蛋白 BMP2 骨形態(tài)發(fā)生蛋白2抗體鹽酸地爾硫卓雙(三苯基膦)氫化亞銅Morphine/KLH 嗎啡與血藍(lán)蛋白偶聯(lián)物 BMP3 骨形態(tài)發(fā)生蛋白3抗體鹽酸氟雙(三苯基膦)氫化亞銅Metronidazole/KLH 甲硝唑偶聯(lián)牛血藍(lán)蛋白 BMP4 骨形態(tài)發(fā)生蛋白4抗體鹽酸雷尼替丁1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphate (sodium salt)Morphine/BSA 嗎啡與牛血清白蛋白偶聯(lián)物 BMP6 骨形態(tài)發(fā)生蛋白6抗體鹽酸哌唑1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphate (sodium salt)TRF(transferrin) 轉(zhuǎn)鐵蛋白 BMP7 骨形態(tài)發(fā)生蛋白7抗體鹽酸乙胺丁3,5-二甲氧基肉桂酸,主要為反式Melamine/OVA 三聚氰胺偶聯(lián)雞卵白蛋白 BMP8 骨形態(tài)發(fā)生蛋白8抗體鹽酸異腎上腺素3,5-二甲氧基肉桂酸,主要為反式Melamine/BSA 三聚氰胺偶聯(lián)牛血清白蛋白 BMPR-1A 骨成型蛋白受體1A抗體鹽酸左旋咪唑六氟硅酸銨Melamine/Bov IgG 三聚氰胺偶聯(lián)牛IgG |