操作步驟: 1:樣品準(zhǔn)備:取1毫升細(xì)胞培養(yǎng)上清(貼壁和懸浮細(xì)胞都可以 已培養(yǎng)48小時以上),在16000g離心5分鐘,小心棄去上清,避免丟失沉淀(沉淀量有可能很少,目視看不到)。將沉淀用無菌PBS重懸,在16000g離心5分鐘,同樣小心棄去上清,如此反復(fù)用無菌PBS洗三次 將獲得的沉淀用100微升超純水重懸,置于100℃水浴中孵育5分鐘。如此制備好的樣品可在4℃保存1到2個月。 2:PCR反應(yīng)的準(zhǔn)備: 待各組份融化后先瞬時離心,然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應(yīng)體系,每次實驗需加一個陰性和一個陽性對照,測試反應(yīng)管可以有多個。配制過程中應(yīng)注意無菌,并注意避免操作產(chǎn)生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染,推薦在有風(fēng)壓的設(shè)備如超凈臺或生物安全柜中進行操作。建議配制完畢后瞬時離心以使液體沉至管底。 服務(wù)流程: 接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。 產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 | 禽傳染性支氣管炎病毒型RT-LAMP試劑盒 | RT-LAMP kit for avian infectious bronchitis virus | BJ-P987493 |
它具有下列特點: 1. 即開即用,用戶只需要提供 DNA 模板。 2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化,專一性強,只擴增鮑皰疹樣病毒,與其他植物沒有交叉反應(yīng)。 3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。 4. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。 5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次,但只能用于科研。 ? 使用及效果: PCR反應(yīng)特點 (1) 特異性強 PCR反應(yīng)的特異性決定因素為: ①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合; ②堿基配對原則; ③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性; ④靶基因的特異性與保守性。 其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。 (2) 靈敏度高 PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌。 (3) 簡便、快速 PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。 (4) 對標(biāo)本的純度要求低 不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。 儲存條件: 僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法 1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。 2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。 3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。 5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 PCR實驗方法步驟: 方法 1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5 μl dNTP mix (2mM) 4 μl 引物1(10pM) 2 μl 引物2(10pM) 2 μl Taq酶 (2U/μl) 1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。 3:結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。 100g硬毛栓孔菌Human FDFT1 ELISA Kit 25g哈茨木霉Human FBXO43 ELISA Kit 500g麻孢毛殼Human FBP2 ELISA Kit 1g朗比可假絲酵母Human FBXL13 ELISA Kit 1g四孢菇Human FBXL15 ELISA Kit 5g枯草芽孢桿菌Human FBXL14 ELISA Kit 25g梨黑星Human FBXL16 ELISA Kit 5g新疆鹽地桿菌Human FAU ELISA Kit 1g突孢毛殼Human FBF1 ELISA Kit 250mg黑曲霉變種Human FBP2 ELISA Kit 100g堿線菌屬Human FBLIM1 ELISA Kit 25g赤霉菌Human FBXL14 ELISA Kit 1g無環(huán)田頭菇Human FBXL13 ELISA Kit 1gCandidatus Rhizobium Human FBXL15 ELISA Kit 5g大腸埃希菌Human FBXL18 ELISA Kit 1gAg-16(蘑菇)Human FBXL16 ELISA Kit 25g柿尾孢Human FBXL8 ELISA Kit 禽傳染性支氣管炎病毒型RT-LAMP試劑盒孟加拉紅氯霉素瓊脂人少突膠質(zhì)前體細(xì)胞(懸浮生長)總RNA鄰溴苯酸DKK1(Dickkopf 1) 抑癌蛋白DKK1抗原 DRBC Agar (Dichloran Rose Bengal Chloramphenicol)人雪旺細(xì)胞總RNA鄰溴苯酸DMBT1 (Deleted in malignant brain tumor 1) DMBT1抑癌基因抗原 緩沖蛋白胨水人神經(jīng)束膜細(xì)胞總RNA4-溴-1-茚酮DNA-PKcs peptide DNA依賴蛋白激酶催化亞基多肽抗原 Buffered Peptone Water Preenrichment人星形膠質(zhì)細(xì)胞總RNA4-溴-1-茚酮DPPA2 (developmental pluripotency associated gene2) 多能發(fā)育相關(guān)基因2抗原 Fluid Tetrathionate Medium人小腦星形膠質(zhì)細(xì)胞總RNA2,3-二氯苯酸DR4/APO2/TRAILR1 (Death receptor 4) 死亡受體4抗原 RV R10肉湯人脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞總RNA2,3-二氯苯酸DR5/TNFRSF10B/CD262 (Death receptor 5) 腫瘤細(xì)胞調(diào)亡素/死亡受體5抗原 Rappaport-Vassiliadis R10 Broth人海馬趾星形膠質(zhì)細(xì)胞總RNA3,4-二氯苯酸DP-I/DSP(desmoplakin I ) 橋粒斑蛋白1抗原 Fluid Selenite - Cystine Medium人小膠質(zhì)細(xì)胞總RNA3,4-二氯苯酸DVL1 (dishevelled 1) 蓬亂蛋白1 |