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PA317(小鼠成纖維細胞)說明書
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產品特點:
PA317(小鼠成纖維細胞)說明書加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如,每隔10分鐘),如顏色較深,請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應,避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數。
  PA317(小鼠成纖維細胞)說明書的詳細資料:

運輸和保存:
視天氣狀況和運輸距離遠近,公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸;收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng),如無法立刻進行復蘇操作,凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸;收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作,如懸浮的細胞較多,請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。

產品名稱

PA317(小鼠成纖維細胞)說明書

英文名稱

PA317 (mouse fibroblast cells)

規(guī)格

5×106cells

培養(yǎng):
1.取出小鼠后瀝干酒精,放入超凈臺內,固定在泡沫板上。
2.用鑷子提起皮膚,用解剖剪剪開皮膚一個橫切口,將皮膚向上撕開,然后剪開肌肉等,暴露出腹腔,在左側找到脾臟,用彎頭眼科鑷取出脾臟,置于無菌培養(yǎng)皿中。
3.用生理鹽水將取出的脾臟清洗多次,并剔除多余無用的組織。
4.將篩網置于平皿中,脾臟置于篩網上,用彎頭鑷鑷住,輕輕在篩網上進行碾磨,同時不停滴加不含血清的培養(yǎng)液沖洗。
5.將碾磨好的細胞懸液吸入至離心管中,離心(1000rpm,5min),吸去上清(去除血液等)。
6.加入10ml培養(yǎng)液,吹打混勻,取樣計數。
7.將稀釋好的細胞懸液分裝于培養(yǎng)瓶中,輕輕搖晃混勻,在培養(yǎng)瓶上。
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細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作流程:
1.1主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內,在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數 常規(guī)消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數板四角大方格細胞數,按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液=(四方格細胞數之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) =計算貼壁率。 
1.6 生長曲線 取指數生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數每孔細胞的數目并計算平均值。連續(xù)計數10d,繪制細胞生長曲線。
羅昔康-d3 質量規(guī)格:美國進口 Piroxicam-d3 小鼠胰島素瘤細胞英文名稱:MIN6

異鼠李素-3-O-葡萄糖苷 規(guī)格: HPLC≥98%;10mg 訂購|咨詢 ELISA Kit for Human Integrin beta-3小鼠成纖維細胞生長因子7(FGF7)ELISA試劑盒,英文名:FGF7 ELISA Kit

鹽右旋體(鹽雜質B)  英文名稱:Ropivacaine hydrochloride dextroisomer (ropivacaine hydrochloride impurity B)   保存:-20℃   規(guī)格:20mg 化血小板源性生長因子受體α

棕櫚 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢 人解偶聯蛋白1(UCP-1)ELISA試劑盒人96T78-5000 pg/mL大鼠膽綠素還原酶A(BLVRA)ELISA試劑盒,英文名:BLVRA ELISA Kit

酰紫堇靈 訂購|咨詢 規(guī)格: 20mg 人乳脫酶(LDH)ELISA試劑盒人96T3.12-200 U/L大鼠酰膽堿受體抗體(AChRab)ELISA試劑盒,英文名:AChRab ELISA Kit

刺五加苷E 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢 人鈣粘素6(Cadherin-6)ELISA試劑盒人96T0.312-20 ng/mL小鼠骨保護素配體(OPGL)ELISA試劑盒,英文名:OPGL ELISA Kit

益母草  英文名稱:Motherwort   保存:-20℃   規(guī)格:1g 癌易感基因相關蛋白2

牛熊去氧膽 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢 ELISA Kit for Human S-adenosylmethionine synthase isoform type-1大鼠尿苷二葡萄糖醛轉移酶2(UGT2)ELISA試劑盒,英文名:UGT2 ELISA Kit

珠子草  英文名稱:Bead grass   保存:-20℃   規(guī)格:0.5g 類固受體激活蛋白3抗體  

奧昔康唑(標準品) 質量規(guī)格:HPLC法含量測定 Oxiconazole Nitrate 人結腸細胞桔橙小單孢菌 Micromonospora aurantiaca

綠茶(茶葉)  英文名稱:Green tea (tea)   保存:-20℃   規(guī)格:1g 化谷氨受體2B抗體  

水楊鈉;純品型;標準品;有證書 規(guī)格: 0.1g 訂購|咨詢 MDA-MB-231(人腺細胞)5×106cells/瓶×2

甘露聚糖肽  英文名稱:Mannan peptide   保存:-20℃   規(guī)格:100mg 髓鞘相關糖蛋白-a抗體  

PA317(小鼠成纖維細胞)說明書基苯酞 CAS 551-08-6 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢

對甲氧基桂酸乙酯 CAS 24393-56-4 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢

長梗冬青苷 CAS 42719-32-4 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢

穿心蓮內酯 CAS 5508-58-7 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢

表小檗堿 CAS 1816598 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢

原兒茶酸 CAS 99-50-3 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢

二氫歐山芹素 CAS 3804-70-4 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢

芝素 CAS 607-80-7 規(guī)格: HPLC≥98%,20mg/vial 訂購|咨詢

土貝母皂甙甲 CAS 102040-03-9 規(guī)格: HPLC≥98%,20mg/vial 訂購|咨詢

雷公藤內酯 CAS 38647-11-9 規(guī)格: HPLC≥98%,20mg/vial 訂購|咨詢

香葉木素-7-O-Β-D-葡萄糖苷 CAS 20126-59-4 規(guī)格: HPLC≥98%,20mg/vial 訂購|咨詢

五味子甲素 CAS 61281-38-7 規(guī)格: HPLC≥98%,20mg/vial 訂購|咨詢

甘草苷 CAS 551-15-5 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg/vial 訂購|咨詢

CAS 18524-94-2 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg/vial 訂購|咨詢

實驗事項:
1. 試劑準備:所有試劑都必須在使用前達到室溫,使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭,避免交叉污染。
2.   加樣:加樣或加試劑時,請注意在吸取標本 / 標準品,酶結合物或底物時,前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,將會導致不同的“預孵育"時間,從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內,如標本數量多,推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育:為防止樣品蒸發(fā),試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內,酶標板加上蓋或覆膜,以避免液體蒸發(fā);洗板后應盡快進行下步操作,任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態(tài);同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌:洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干,勿將濾紙直接放入反應孔中吸水,同時要消除板底殘留的液體和手指印,避免影響后的酶標儀讀數。
5.  試劑配制:Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理,以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據所需的量配置使用,并使用相應的稀釋液配制,不能混淆。請確配置標準品及工作液,盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時,一次不要小于10μl),以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差;請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應時間的控制:加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如,每隔10分鐘),如顏色較深,請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應,避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數。
7.  底物:底物請避光保存,在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設雙孔測定,以保證檢測結果的準確性。
    如標本中待測物質含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請后乘以稀釋倍數。

 

產品相關關鍵字: PA317 小鼠成纖維細胞 5×106cells
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