操作步驟: 1:樣品準(zhǔn)備:取1毫升細胞培養(yǎng)上清(貼壁和懸浮細胞都可以 已培養(yǎng)48小時以上),在16000g離心5分鐘,小心棄去上清,避免丟失沉淀(沉淀量有可能很少,目視看不到)。將沉淀用無菌PBS重懸,在16000g離心5分鐘,同樣小心棄去上清,如此反復(fù)用無菌PBS洗三次 將獲得的沉淀用100微升超純水重懸,置于100℃水浴中孵育5分鐘。如此制備好的樣品可在4℃保存1到2個月。 2:PCR反應(yīng)的準(zhǔn)備: 待各組份融化后先瞬時離心,然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應(yīng)體系,每次實驗需加一個陰性和一個陽性對照,測試反應(yīng)管可以有多個。配制過程中應(yīng)注意無菌,并注意避免操作產(chǎn)生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染,推薦在有風(fēng)壓的設(shè)備如超凈臺或生物安全柜中進行操作。建議配制完畢后瞬時離心以使液體沉至管底。 服務(wù)流程: 接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。 產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 | 大腸彎曲桿菌LAMP試劑盒圖片 | Campylobacter coli lamp Kit | BJ-P987644 |
它具有下列特點: 1. 即開即用,用戶只需要提供 DNA 模板。 2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化,專一性強,只擴增鮑皰疹樣病毒,與其他植物沒有交叉反應(yīng)。 3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。 4. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。 5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次,但只能用于科研。 ? 使用及效果: PCR反應(yīng)特點 (1) 特異性強 PCR反應(yīng)的特異性決定因素為: ①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合; ②堿基配對原則; ③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性; ④靶基因的特異性與保守性。 其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。 (2) 靈敏度高 PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學(xué)中zui小檢出率為3個細菌。 (3) 簡便、快速 PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。 (4) 對標(biāo)本的純度要求低 不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。 儲存條件: 僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法 1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。 2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。 3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。 5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 PCR實驗方法步驟: 方法 1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5 μl dNTP mix (2mM) 4 μl 引物1(10pM) 2 μl 引物2(10pM) 2 μl Taq酶 (2U/μl) 1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。 3:結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。 500g米曲霉Human ADARB2-AS1 (Putative uncharacterized protein ADARB2-AS1) ELISA KIT 250g根桿菌屬Human PC (Pyruvate carboxylase, mitochondrial) ELISA KIT 1g近平滑假絲酵母Human QRFPR (Pyroglutamylated RFamide peptide receptor) ELISA KIT 5g淡色生赤殼Human PYCARD (Apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD) ELISA KIT 100g金色橫裂鏈霉菌Human ECM29 (Proteasome-associated protein ECM29 homolog) ELISA KIT 25g傳染性支氣管炎病毒Human PROCA1 (Protein PROCA1) ELISA KIT 5g稻生黃單胞菌Human BORA (Protein aurora borealis) ELISA KIT 25g酒色青霉Human PPP1R13B (Apoptosis-stimulating of p53 protein 1) ELISA KIT 5g紫桿菌*Human POMK (Protein O-mannose kinase) ELISA KIT 25g米曲霉Human PKN1 (Serine/threonine-protein kinase N1) ELISA KIT 5gBacillus tequilensisHuman PPP2R4(Serine/threonine-protein phosphatase 2A activator) ELISA Kit 25ml繩狀籃狀菌Human METRN(Meteorin) ELISA Kit 5ml產(chǎn)黃青霉Human PAFAH1B1 (Plaet-activating factor acetylhydrolase IB subunit alpha) ELISA KIT 100ml綠色木霉Human PSKH1 (Serine/threonine-protein kinase H1) ELISA KIT 25ml假單胞菌Human LAMA3(Laminin subunit alpha-3) ELISA Kit 500ml栓菌Human PPME1 (Protein phosphatase methylesterase 1) ELISA KIT 1g三葉草根瘤菌Human PXDC1 (PX domain-containing protein 1) ELISA KIT 大腸彎曲桿菌LAMP試劑盒圖片CLEC2/CLEC1B C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族1成員B抗體人參三丁酸-4-甲基傘形酮Human ApoC3 (Apolipoprotein C3) ELISA Kit C-Mer/MERTK c-mer原癌基因酪氨酸激酶抗體人參皂苷Rgl4-羥基苯甲酸苯酯Human ApoC4 (Apolipoprotein C4) ELISA Kit CLEC13D/CD206 巨噬細胞甘露糖受體抗體人參皂苷Rb14-羥基苯甲酸苯酯Human ApoD (Apolipoprotein D) ELISA Kit C-Met/Met/HGFR 肝細胞生長因子受體抗體2-甲氧基酚噻Human ApoE (Apolipoprotein E) ELISA Kit Phospho-Met (Tyr1003) 磷酸化肝細胞生長因子受體(原癌基因)抗體水楊酸甲酯3-環(huán)己基-1-炔Human ApoF (Apolipoprotein F) ELISA Kit Phospho-Met (Tyr1234/1235) 磷酸化肝細胞生長因子受體(原癌基因)抗體丹皮酚3-環(huán)己基-1-炔Human ApoH (Apolipoprotein H) ELISA Kit Phospho-Met (Tyr1349) 磷酸化肝細胞生長因子受體(原癌基因)抗體齊墩果酸1-溴-2,4-二甲氧基苯Human ApoM (Apolipoprotein M) ELISA Kit CMKLR1/CHEMR23 趨化樣因子受體1抗體桂皮1-溴-2,4-二甲氧基苯Human CA6 (Carbonic Anhydrase VI) ELISA Kit |