培養(yǎng)操作步驟 ： 1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）； 3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時； 4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中； 5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。 產(chǎn)品參數(shù)： 中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品貨號 | 細胞周期檢測試劑盒 |
| 20T|50T|100T | BJ-01X6522 |
商品詳細介紹： 細胞周期(cell cycle)是指細胞從前一次分裂結(jié)束起到下一次分裂結(jié)束為止的活動過程，通常由G0/G1 期、S 期、G2 期和M 期組成。G1 期：細胞開始RNA和蛋白質(zhì)的合成，但DNA含量仍保持二倍體。S 期：DNA 開始合成，這時細胞核內(nèi)DNA的含量介于G1 期和G2 期之間。當(dāng)DNA 復(fù)制結(jié)束成為4倍體時，細胞進入G2 期。G2 期的細胞繼續(xù)合成RNA及蛋白質(zhì)，直到進入M 期。因此，單純從DNA含量無法區(qū)分G2 期和M 期。一旦有絲分裂發(fā)生，細胞分裂成兩個細胞，這兩個細胞或者進入下一個細胞周期，或者進入靜止期(G0期)，而G0 期從DNA含量上同樣無法與G1 期區(qū)分。因此，整個復(fù)制周期可以描述為G0/G1、S、G2/M 期。通過核酸染料PI標(biāo)記DNA,并由流式細胞儀進行分析，可以得到細胞各個時期的分布狀態(tài)，計算出G0/G1%、S%、G2/M%，了解增殖能力，在腫瘤病理學(xué)研究中，通常以S 期細胞比率作為判斷腫瘤增殖狀態(tài)的指標(biāo)。 PI 為插入性核酸熒光染料，能選擇性的嵌入核酸DNA和RNA 雙鏈螺旋的堿基之間與之結(jié)合，其結(jié)合的量與DNA的含量成正比例關(guān)系，用流式細胞儀進行分析，就可以得到細胞周期各個階段的DNA分布狀態(tài)，從而計算出各個期的百分含量。PI染色后，假設(shè)G0/G1期細胞的熒光強度為1，那么含有雙份基因組DNA的G2/M 期細胞的熒光強度的理論值為2，正在進行DNA 復(fù)制的S 期細胞的熒光強度為1-2 之間。 細胞周期檢測試劑盒是利用細胞內(nèi)DNA 能夠和熒光染料結(jié)合的特性，細胞各個時期其DNA含量不同從而結(jié)合的熒光染料不同，流式細胞儀檢測的熒光強度也不一樣來檢測細胞周期。 儲存條件：-20℃避光保存。 有效期：一年。 |
實驗報告： 一、分離與培養(yǎng)： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 
實驗要點及說明： 1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法； 2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理； 3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕； 4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率； 5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。 操作要點： 1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。 2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。 3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。 4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。 5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。 6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。 Treponema carateum斑點病密螺旋體LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Cephalosporium gramineum麥類條斑病PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Campylobacter coli大腸彎曲桿LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Streptococcus pyogenes化膿性鏈球（釀膿鏈球）探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Human Immunodeficiency Virus 1(HIV-1M-C)人免疫缺陷病毒1型M群C型RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Folium nelumbinis荷葉PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 兔源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Spodoptera litura Nucleopolyhedrovirus（SlNPV）斜紋夜蛾核型多角體病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 種源性檢測 50次 低溫 負20度 一年 3-4周 Borrelia garinii伽氏疏螺旋體（伽氏包柔螺旋體）LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Listeria monocytogenes單核 增生李斯特探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Rickettsia gravesii白堊立克次氏體探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Choanotaenia infundibulum漏斗狀帶絳蟲LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 細胞周期檢測試劑盒人蛋白激活復(fù)合體亞基2(PSME2)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 棉子糖發(fā)酵管 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：20支 人MYC誘導(dǎo)核抗原(MINA)免疫試劑盒*直銷 豬肺炎支原體抗體(MP-Ab)免疫試劑盒*直銷 牛主要組織相容性復(fù)合體(MHC/BoLA)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 小鼠Ⅸ(FⅨ)免疫試劑盒進口、分裝 雞馬立克氏病病毒(MDV)抗體(IgM)免疫試劑盒*直銷 小鼠β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白(β-TG)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 大鼠心肌特異性肌鈣蛋白T(c)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 兔誘導(dǎo)型一氧化氮合成(iNOS)免疫試劑盒進口、分裝 大鼠饑餓激素(GHRL)免疫試劑盒*直銷
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