產(chǎn)品參數(shù)：

商品詳細(xì)介紹：

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。 

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；

4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；

5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

4補(bǔ)充中2

CAS登錄號(hào)：   68027-15-6

分子式：   C47H76O17

分子量：   912

分子結(jié)構(gòu)：     

4補(bǔ)充中3

CAS登錄號(hào)：   848784-87-2

分子式：   C47H76O16

分子量：   896

分子結(jié)構(gòu)：     

Hederacolchiside A1

CAS登錄號(hào)：   106577-39-3

分子式：   C47H76O16

分子量：   896

分子結(jié)構(gòu)：     

黃花敗醬苷C

英文名：   Scabioside C

英文別名：   Leontoside B

CAS登錄號(hào)：   17233-22-6

分子式：   C41H66O13

白頭翁皂苷A3

英文名：   Pulchinenoside A3

英文別名：   (3beta,4alpha)-3-[[2-O-(6-Deoxy-alpha-L-mannopyranosyl)-alpha-L-arabinopyranosyl]oxy]-23-hydroxylup-20(29)-en-28-oic acid;Pulchinenoside A

CAS登錄號(hào)：   129724-84-1

分子式：   C41H66O12

α-常春藤皂苷

英文名：   α-hederin

英文別名：   (3-beta,4-alpha)-nopyranosyl)oxy)-23-hydroxy;akebiasaponinpd

CAS登錄號(hào)：   27013-91-8

分子式：   C41H66O12

異佛司可林

英文別名：   6β-Acetoxy-1α,7β,9α-trihydroxy-8,13-epoxy-labd-14-en-11-one

CAS登錄號(hào)：   64657-21-2

分子式：   C22H34O7

分子量：   410.5

硫酸長(zhǎng)春質(zhì)堿

CAS登錄號(hào)：   70674-90-7

分子式：   C21H26N2O6S

分子量：   434.51

分子結(jié)構(gòu)：     

環(huán)氧澤瀉烯

英文別名：   (1S,3aR,4R,8aS)-1,2,3,3a,4,5,6,8a-Octahydro-1,4-dimethyl-7-(1-methylethyl)-1,4-azulenediol

CAS登錄號(hào)：   87701-68-6

分子式：   C15H26O2

分子量：   238.37

宋果靈

英文名：   Songorine

英文別名：   Napellonine、Zongorine、Bullatine G

CAS登錄號(hào)：   509-24-0

分子式：   C22H31NO3

五味子酚

英文別名：   5,6,7,8-Tetrahydro-1-acetoxy-2,3,10,11,12-pentamethoxy-6α,7α-dimethyldiben

CAS登錄號(hào)：   69363-14-0

分子式：   C23H30O6

分子量：   402.5

USP1/UAF1復(fù)合體抑制劑(SJB2-043)支原體檢測(cè)試劑盒  100T-200T  Mycoplasma Detection Kit血瓊脂基礎(chǔ)2號(hào) Blood Agar Base N0.2 250g

ANNEXIN V- FITC/PI凋亡檢測(cè)試劑盒  20T|50T||100T  Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit1瓶 LA795(上皮樣)細(xì)胞株 LA795(上皮樣) 低溫運(yùn)輸和保存

PI溶液(1mg/ml)  1ml  Propidium Iodide Solution醇麥康凱瓊脂基礎(chǔ)（SMAC） Sorbitol Maconkey Agar Base 250g

Hoechst 33258 染色液(即用型)  10ml|50mL  Hoechst 33258 Stain solution(ready-to-use)1g 原 Chymotrypsinogen 4℃保存

Hoechst 33342 染色液(即用型)  10ml|50mL  Hoechst 33342 Stain solution(ready-to-use)250mL Stripping Buffer 2,4X  Stripping Buffer 2,4X  常溫保存

JC-1線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒  20T|50T|100T  50次 動(dòng)物線粒體總蛋白提取劑盒  

正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞與壞死細(xì)胞檢測(cè)試劑盒  100T  2 ug pSIREN-Retro Q pSIREN-Retro Q 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

細(xì)胞存活率檢測(cè)試劑盒  100T  25次 磁珠法mRNA提取試劑盒  

Hoechst33342/PI雙染試劑盒  100T  2 ug pCMV-SPORT6 DNAJC7 pCMV-SPORT6 DNAJC7 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

AO/EB雙染試劑盒  100T  改良Camp-BAP氏瓊脂添加劑A Modified Camp-BAP Agar additive A 1ml*5

DAPI染色試劑盒  100T  1g 硫酸鹽 Protamine Sulfate Salt 室溫干燥保存