培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。 

產品參數(shù)：

商品詳細介紹：

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；

5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。

人 FCGR2B / CD32b 轉錄變體2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽環(huán)境鈣離子濃度熒光定量檢測試劑盒  20次

人 FCGR2B / CD32b 轉錄變體2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽石蠟切片馮庫薩（VON KOSSA）鈣染色試劑盒  50次

人 DcR3 / TNFRSF6B 轉錄變體M68E 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽冰凍切片馮庫薩（VON KOSSA）鈣染色試劑盒  50次

人 LCN2 / NGAL 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽細胞馮庫薩（VON KOSSA）鈣染色試劑盒  50次

人 LCN2 / NGAL 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽全組織馮庫薩（VON KOSSA）鈣染色試劑盒  10次

人 CSF3R / CD114 / G-CSFR 轉錄變體1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽石蠟切片茜素紅（ALIZARIN RED S）鈣染色試劑盒  50次

人 Dectin-1 / CLEC7A 轉錄變體2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽冰凍切片茜素紅（ALIZARIN RED S）鈣染色試劑盒  50次

人 Dectin-1 / CLEC7A 轉錄變體2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽細胞茜素紅（ALIZARIN RED S）鈣染色試劑盒  50次

人 FGF7 / KGF 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽全組織茜素紅（ALIZARIN RED S）鈣染色試劑盒  10次

人 FGF7 / KGF 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽細胞銅離子濃度比色法定量檢測試劑盒  20次

人 CD209 / DC-SIGN 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽組織銅離子濃度比色法定量檢測試劑盒  20次

bromodomain抑制劑(GSK 525768A)EVC2  膜蛋白EVC2抗體 規(guī)格: 0.1ml

Donkey Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350標記的驢抗豚鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml

Phospho-Mcl1 (Ser159/Thr163)  磷酸化髓樣細胞白-1抗體 規(guī)格: 0.1ml

Mouse Anti-Bov IgG/PE-Cy7  PE-Cy7標記的小鼠抗牛IgG 規(guī)格: 0.1mlDCAF13  DCAF13蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

Rabbit anti-MG IgG/PE-Cy7  PE-Cy7標記的兔抗爪沙鼠IgG 規(guī)格: 0.1mlRabbit Anti-Bovine IgM  兔抗牛IgM 規(guī)格: 1mg

RBM3  RNA結合基因蛋白3抗體 規(guī)格: 0.2ml

G protein alpha S  G蛋白αS抗體（核苷酸結合蛋白Gα s） 規(guī)格: 0.2mlphospho-Bid(Ser61)  磷酸化BH3結構域凋亡誘導蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

Rabbit Anti-MK IgM/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350標記的兔抗猴IgM 規(guī)格: 0.1ml

CCDC144A  卷曲螺旋結構域蛋白144A抗體 規(guī)格: 0.2ml

Phospho-SEK1/MKK4 (Ser257)  磷酸化絲裂原活化蛋白激激4抗體 規(guī)格: 0.1ml

PCDHGA8  原鈣粘蛋白γA8抗體 規(guī)格: 0.2ml