操作規(guī)程 1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時. 2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。 3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。 4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。 6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。 7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。 8、結(jié)果分析 a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100 b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90) 中文名稱：蛋白A純化預(yù)裝柱 英文名稱：Protein A 4FF Chromatography Column, 1ML 產(chǎn)品規(guī)格：1ml 產(chǎn)品貨號：BJ-01X6417 本品Protein A 4FF Chromatography Column，1ml是一種裝填了Protein A Agarose Resin 4FF的中壓預(yù)裝柱，規(guī)格1ml，預(yù)裝柱具有標準接口，可以適配商品化的各類中壓色譜系統(tǒng)，如?KTA 等，方便客戶操作。 天然蛋白A（Protein A）是一種發(fā)現(xiàn)于的細胞壁表面蛋白，與分離自G型或C型鏈球菌屬的蛋白G類似，主要通過與免疫球蛋白（Ig）的Fc區(qū)相互作用，結(jié)合大多數(shù)哺乳動物的IgG，可用于多種抗體（單抗和多抗）的分離純化。在與不用的免疫球蛋白亞類的結(jié)合特性上，ProteinA 和Protein G結(jié)合性能不太一樣（詳見附錄1）。 本品使用的是基因改造后的蛋白A，不僅維持其本身的Ig親和特性，同時也去除了天然蛋白本身的非主要結(jié)合域以降低非特異性結(jié)合，Protein A Agarose Resin 4FF以高度交聯(lián)的瓊脂糖凝膠為基質(zhì)，重組Protein A為配基，具有很高的物理化學(xué)穩(wěn)定性，可以在相對較高的流速下進行抗體的純化，適用于工業(yè)客戶。利用本品經(jīng)過一步親和層析，即可從腹水、血清和培養(yǎng)液等樣品中得到高純度的抗體，使用方便，應(yīng)用廣泛。 基質(zhì)（Matrix）：高度交聯(lián)的4%瓊脂糖微球 配體（Ligand）：重組蛋白A 孔徑（Bead size）：45-165μm 大流速（Flowmax）：0.3MPa,3bar 儲存緩沖液：含20%乙醇的1×PBS 載量（Capacity）：＞40mg human IgG/ml 基質(zhì) pH范圍：3-12 儲存條件：4℃，有效期兩年 |
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程： 一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備： 1） 準備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。 2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。 二． 細胞處理： 1） 復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。 2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
細胞培養(yǎng)方法： 1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代 ①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次； ②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化； ③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止； ④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清； ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基； ⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。 2、細胞復(fù)蘇： ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。 ②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。 3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種 ①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶） ②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化； ③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞； ④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。 Arisaema cum bile染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Radix pulsatillae白頭翁LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Avian Pathogenicity Escherichia coli(APEC) 禽致病性大腸桿O1血清型探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Goose Parvovirus(GPV)鵝細小病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Borrelia garinii伽氏疏螺旋體（伽氏包柔螺旋體）LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Pericarpium citri reticulatae陳皮探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Acidovorax avenae ssp. cattleyae蘭花褐斑病PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Equine Coital Exanthema Virus(同馬皰疹病毒3型)馬疹病病毒LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Influenza Virus B 乙型流感病毒RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Paranavirus(PARV)帕臘南病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Bundibugyo Ebola Virus(BDBV)本迪布焦型埃博拉病毒RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Caulis bambusae in taenia竹茹染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 蛋白A純化預(yù)裝柱D-環(huán)絲溶液 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：5ml*10 P16蛋白表達ELISA定量檢測試劑盒 25次 植物胱硫醚-γ-合成（cystathionine γ-synthase；CGS）活性熒光定量檢測試劑盒 20次 改良卵黃瓊脂基礎(chǔ) 英文名稱：Mannitol-Egg-Yolk-Polymycin Agar Base,Modified 產(chǎn)品規(guī)格：250g OXALATE（鈉鹽）血液抗凝液 100毫升 植物過氧化物（peroxidase）活性比色法定量檢測試劑盒 20次 植物甘肽還原活性比色法定量檢測試劑盒 20次 冰凍切片衰老特異性β-半乳糖苷原位染色試劑盒 50次 BJ5183電轉(zhuǎn)感受態(tài)細 5 X 100微升 產(chǎn)氣莢膜梭α（Clostridium perfringens cpa）鑒定16S rDNA PCR擴增檢測試劑盒 20次 BrdU標記法組織冰凍切片細胞繁殖NBT顯色檢測試劑盒 10/20次
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