操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

中文名稱：改良油紅O染色試劑盒

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：100ml|200ml

產(chǎn)品貨號：BJ-01X6654

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

2 ug pcDNA6.2-GW EmGFP-miR pcDNA6.2-GW EmGFP-miR 低溫運輸，-20℃保存

50次 柱式白色念珠菌RNAout   78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Vascular endothelial growth factor A

2 ug pBAD43 pBAD43 低溫運輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Aldehyde oxidase

100U CpG 甲基轉(zhuǎn)移（M.SssI） CpG Methyltransferase（M.SssI） -20℃保存 15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Interleukin-3

5次 97孔板病毒DNAout(離心法) 96 Microwell Plate Viral DNAOUT 常溫 125-8000 pg/mL 人T表面糖蛋白CD3ε鏈（T-cell surface glycoprotein CD3 epsilon chain）ELISA試劑盒

2 ug pYRP7 pYRP7 低溫運輸，-20℃保存 31.2-2000 pg/mL ELISA Kit for Human Toll/interleukin-1 receptor domain-containing adapter protein

1 管 EBY100酵母菌 EBY100 Yeast Strain -80℃保存 0.156-10 ng/mL 人白活化黏附因子(ALCAM)ELISA試劑盒

250mL Glycine Buffer（緩沖液）,0.2M,pH3.5   Glycine Buffer,0.2M,pH3.5   常溫保存

2 ug pUC 20 pUC 20 低溫運輸，-20℃保存

10次 克必隆eTS miRNA RT-PCR試劑盒  

1mL TCEP 鹽酸膦 TCEP•HCl -20℃保存動力--尿素培養(yǎng)基基礎(chǔ)(MIU) 進口、國產(chǎn)Motility Indol Urea Medium Base用于細菌的復合生化試驗250

改良油紅O染色試劑盒人血管緊張素原(aGT)免疫試劑盒進口、分裝

駱駝天門冬氨基轉(zhuǎn)移(AST)免疫試劑盒*直銷

人羥賴(Hyl)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應

陰溝腸桿菌分離瓊脂（ECIA） 英文名稱：Enterobacter Cloacae Isolation Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g

人抗磷壁酸抗體(TA)免疫試劑盒*直銷

李氏菌增菌肉湯(LB1,LB2)基礎(chǔ) 英文名稱：Listeria Enrichment Broth Base 產(chǎn)品規(guī)格：250g

人富組糖蛋白(HRG)免疫試劑盒進口、組裝

發(fā)光菌培養(yǎng)基 英文名稱：photobacterium Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g

人α酮戊二酸脫氫(α-KGDHC)免疫試劑盒進口、分裝

豬食欲素受體(OXR)免疫試劑盒進口、分裝

犬腦鈉素/腦鈉尿肽(BNP)免疫試劑盒*直銷