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Annexin V-FITC細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品型號(hào)：
產(chǎn)品報(bào)價(jià)：
產(chǎn)品特點(diǎn)：	Annexin V-FITC細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒公司正在出售的產(chǎn)品：31.2-2000 pg/mL ELISA Kit for Mouse C-X-C motif chemokine 15 78-5000 pg/mL 人cAMP依賴(lài)蛋白激催化亞基β (PKA C-beta)ELISA試劑盒 0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Monocyte differentiat

Annexin V-FITC細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒的詳細(xì)資料：

中文名稱(chēng)：Annexin V-FITC細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒

英文名稱(chēng)：Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit

產(chǎn)品規(guī)格：20次|50次

產(chǎn)品貨號(hào)：BJ-01X6331

本試劑盒是用FITC標(biāo)記的重組人Annexin V來(lái)檢測(cè)細(xì)胞凋亡時(shí)出現(xiàn)在細(xì)胞膜表面的磷脂酰絲的一種細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒?？梢允褂昧魇郊?xì)胞儀、熒光顯微鏡或其它熒光檢測(cè)設(shè)備進(jìn)行檢測(cè)。一個(gè)包裝的本試劑盒共可以檢測(cè)20個(gè)細(xì)胞樣品。

試劑盒組份：

Annexin V-FITC——————100μl

Annexin V-FITC結(jié)合液———12ml

碘化丙啶染色液——————220μl

Annexin是一類(lèi)廣泛分布于真核細(xì)胞細(xì)胞漿內(nèi)鈣離子依賴(lài)的磷脂結(jié)合蛋白，參與細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。但僅Annexin V被報(bào)道可以調(diào)控一些PKC的活性。

Annexin V選擇性結(jié)合磷脂酰絲(phosphatidylserine，簡(jiǎn)稱(chēng)PS)。磷脂酰絲主要分布在細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)，即與細(xì)胞漿相鄰的一側(cè)。在細(xì)胞發(fā)生凋亡的早期，不同類(lèi)型的細(xì)胞都會(huì)把磷脂酰絲外翻到細(xì)胞表面，即細(xì)胞膜外側(cè)。磷脂酰絲暴露到細(xì)胞表面后會(huì)促進(jìn)凝血和炎癥反應(yīng)。而Annexin V和外翻到細(xì)胞表面的磷脂酰絲結(jié)合后可以阻斷磷脂酰絲的促凝血和促炎癥反應(yīng)活性。

用帶有綠色熒光的熒光探針FITC標(biāo)記的Annexin V，即Annexin V-FITC，就可以用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡非常簡(jiǎn)單而直接地檢測(cè)到磷脂酰絲的外翻這一細(xì)胞凋亡的重要特征。

本試劑盒還提供了碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)染色液，碘化丙啶可以染色壞死細(xì)胞或凋亡晚期喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，呈現(xiàn)紅色熒光。對(duì)于壞死細(xì)胞，由于細(xì)胞膜的完整性已經(jīng)喪失，Annexin V-FITC可以進(jìn)入到細(xì)胞漿內(nèi)，與位于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)的磷脂酰絲結(jié)合，從而也使壞死細(xì)胞呈現(xiàn)綠色熒光。

本試劑盒的流式檢測(cè)效果參考圖1和圖2，熒光顯微鏡檢測(cè)效果參考圖3。

1.細(xì)胞用本試劑盒染色后流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡的效果圖。Jurkat細(xì)胞未經(jīng)處理(A)或用10μM(Camptothecin)作用4小時(shí)(B)后，用本試劑盒染色，然后用流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞的散射和熒光檢測(cè)。從圖中可以看出，經(jīng)過(guò)凋亡誘導(dǎo)劑處理后的細(xì)胞，其Annexin V-FITC染色陽(yáng)性并且PI染色陰性的細(xì)胞，即凋亡細(xì)胞，明顯增加(B圖的右下象限)，Annexin V-FITC和PI染色雙陽(yáng)性的細(xì)胞，即壞死細(xì)胞，也有所增加(B圖的右上象限)。圖中Annexin V-FITC染色陰性PI染色陽(yáng)性(Annexin V-/PI+)所在象限(A和B圖的左上象限)出現(xiàn)的細(xì)胞點(diǎn)是許可范圍內(nèi)的檢測(cè)誤差。實(shí)測(cè)數(shù)據(jù)可能會(huì)因細(xì)胞類(lèi)型、細(xì)胞凋亡情況、檢測(cè)儀器等的不同而存在差異，圖中數(shù)據(jù)僅供參考。

2.細(xì)胞用本試劑盒染色后流式細(xì)胞儀檢測(cè)效果驗(yàn)證圖。Jurkat細(xì)胞用10μM(Camptothecin)作用4小時(shí)后，未經(jīng)染色(A)、僅用本試劑盒中的PI進(jìn)行染色(B)、僅用本試劑盒中的Annexin V-FITC進(jìn)行染色(C)、用本試劑盒中的Annexin V-FITC和PI進(jìn)行雙染(D)。從圖中可以看出，未經(jīng)染色的是雙陰性細(xì)胞(A)，僅PI染色后出現(xiàn)了預(yù)期的PI染色陽(yáng)性的細(xì)胞，僅Annexin V-FITC染色出現(xiàn)了預(yù)期的Annexin V-FITC染色陽(yáng)性的細(xì)胞，Annexin V-FITC和PI雙染出現(xiàn)了預(yù)期的僅Annexin V-FITC染色陽(yáng)性的凋亡細(xì)胞和雙陽(yáng)性的壞死細(xì)胞。出現(xiàn)的非預(yù)期的細(xì)胞點(diǎn)*在許可的誤差范圍內(nèi)。實(shí)測(cè)數(shù)據(jù)可能會(huì)因細(xì)胞類(lèi)型、細(xì)胞凋亡情況、檢測(cè)儀器等的不同而存在差異，圖中數(shù)據(jù)僅供參考。

儲(chǔ)存條件：4℃避光，有效期6個(gè)月。

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

QQ截圖20220509112004.png

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

Haemophilus suis豬嗜血桿染料法熒光定量PCR試劑盒動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次低溫負(fù)20度一年 2-3周

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支原體肉湯培養(yǎng)基（不含瓊脂和紅）英文名稱(chēng)：Mycoplasma Broth Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g

IL-5（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠） 100微克

紙片（30ug/片）英文名稱(chēng)：Cephalosporin strip 產(chǎn)品規(guī)格：10片/瓶

YM11瓊脂英文名稱(chēng)：YM11 Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g

IL-9（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠） 100微克

NF KAPPA B P50蛋白表達(dá)西方雜交分析試劑盒 5次

定量檢測(cè)試劑盒

溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基（2015藥典）英文名稱(chēng)：Getrimide Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g

細(xì)胞線(xiàn)粒體復(fù)合物II蛋白表達(dá)流式細(xì)胞儀檢測(cè)試劑盒 10/20次

通用型LB細(xì)培養(yǎng)液 500毫升

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

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