操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

中文名稱：Rac GTPase抑制劑（EHop-016）

英文名稱：EHop-016

產品規(guī)格：1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg

產品貨號：BJ-01X8118

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

人 SECTM1 基因全長ORF克隆人李斯特菌抗體(IgG)免疫試劑盒進口、組裝

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Rac GTPase抑制劑（EHop-016）cathepsin K抑制劑(Odanacatib)  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg  Odanacatib50次 DNA電泳分子量標準(φX174 DNA/HaeⅢ) DNAMETER（3） 4℃保存

IDH1抑制劑(Ivosidenib)  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  Ivosidenib2 ug pGEX-4T- 3 pGEX-4T- 3 低溫運輸，-20℃保存

AdipoR激動劑(AdipoRon)  1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg  AdipoRon支原體肉湯培養(yǎng)基 Arginine Mycoplasma Broth Meium 250g

SGK1抑制劑(EMD638683)  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  EMD6386831瓶 GBC-SD細胞株 GBC-SD 低溫運輸和保存

dynaminGTPase抑制劑(Dynasore)  1mL(10mM)|10mg|50mg  Dynasore含100mlBolton肉湯均質袋 Bolton Broth 10個/包

SIRT1激活劑(SRT 1720 Hydrochloride)  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  SRT 1720 Hydrochloride1000 U 限制性內切MluI Restriction Endonuclease -20℃保存

UCP2抑制劑(Genipin)  1mL(10mM)|50mg|100mg  Genipin1mL Protease Inhibitors Cocktail for Mammalian Cells  Protease Inhibitors Cocktail for Mammalian Cells  常溫保存

SGLT2抑制劑(Dapagliflozin)  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  Dapagliflozin500mL 吐溫 -60 Tween-60 室溫密封保存

PPARγ激動劑(Pioglitazone hydrochloride)  1mL(10mM)|100mg|500mg  Pioglitazone hydrochloride2 ug pRSV pRSV 低溫運輸，-20℃保存

ENaC抑制劑(Amiloride hydrochloride)  1mL(10mM)|100mg|500mg  Amiloride hydrochlorideHBI副溶血性弧菌生化鑒定條(SN)  5條/盒

PPARδ激動劑(GW 501516)  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg  GW 5015162 ug pCDH-CMV-MCS-EF1-RFP-Puro pCDH-CMV-MCS-EF1-RFP-Puro 低溫運輸，-20℃保存