操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

中文名稱：PI3K γ和δ抑制劑（TG100-115）

英文名稱：TG100-115

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

產(chǎn)品貨號：BJ-01X7842

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

延胡索甲素

英文別名：   2,3,9,10-tetramethoxy-13-alpha-methyl-13a-beta-berbin

CAS登錄號：   518-69-4

分子式：   C22H27NO4

分子量：   369．44

芫花素

英文名：   Genkwanin

英文別名：   4H-Benzopyran-4-one

CAS登錄號：   437-64-9

分子式：   C16H12O5

野黃芩素

英文名：   Scutellarein

英文別名：   4',5,6,7-Tetrahydroxyflavone; 5,6,7-Trihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-4H-chromen-4-one

CAS登錄號：   529-53-3

分子式：   C15H10O6

喬松素

英文名：   Pinocembrin

英文別名：   (s)-2,3-dihydro-5,7-dihydroxy-2-phenyl-4h-1-benzopyran-4-one

CAS登錄號：   480-39-7

分子式：   C15H12O4

反式茴香腦

英文別名：   (E)-1-METHOXY-4-(1-PROPENYL)BENZENE

CAS登錄號：   104-46-1

分子式：   C10H12O

分子量：   148.2

3, 6′-二芥子?；崽?/span>

英文別名：   DISS

CAS登錄號：   新品待定

分子式：   C34H42O19

分子量：   754.68

人參皂苷Rk1

英文名：   Ginsenoside Rk1

英文別名：   3β,12β-dihydroxydammar-20(21),24-diene-3-O-β-D-glucopyranosyl(1→2)-β-D-glucopyranoside

CAS登錄號：   新品待定

分子式：   C42H70O12

人參皂苷Rg6

英文名：   Ginsenoside Rg6

英文別名：   [dammar-20（21），24-diene-3β，6α，12β-trihydroxy-6-O-α-L-rhamnopyranosyl（-1→2）-β-D-glucopyranoside]

CAS登錄號：   新品待定

分子式：   C42H70O12

羅漢果苷III

英文名：   Mogroside III

CAS登錄號：   130567-83-8

分子式：   C48H82O19

分子量：   963.15

羅漢果苷VI

英文名：   Mogroside VI

CAS登錄號：   89590-98-7

分子式：   C66H112O34

分子量：   1449.58

表兒茶素

英文名：   Epicatechin

英文別名：   CIS-2-[3,4-DIHYDROXYPHENYL]-3,4-DIHYDRO-2H-1-BENZOPYRAN-3,5,7-TRIOL

CAS登錄號：   490-46-0

分子式：   C15H14O6

PI3K γ和δ抑制劑（TG100-115）Annexin V-FITC/PI雙染法細胞凋亡檢測試劑盒  20次/50次/100次  Cell proliferation and toxicity detection kit1 g  Metformin （LKB1-AMPK激活劑） Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存

Tunel細胞凋亡檢測試劑盒（FITC）  10次/20次/50次  Tunel cell apoptosis detection kit（FITC）100mL CAPSO Buffer,0.2M,pH9.5  CAPSO Buffer,0.2M,pH9.5  常溫保存

轉(zhuǎn)染試劑  0.75ml/1ml/1.5ml  100 mL F12培養(yǎng)基（含10%胎牛血清） Cell Culture Medium -20℃保存

細胞周期與凋亡檢測試劑盒  50次/200次/500次  2 ug pGRE-Luc pGRE-Luc 低溫運輸，-20℃保存

高保真KOD試劑盒  50U/200U/1000U  培養(yǎng)基R Medium R (Lactose monohydrate sulphite medium) 250g

細胞增殖與毒性檢測試劑盒（CCK-8）  100次/500次/3000次/10000次  1瓶 HMy2.CIR細胞株 HMy2.CIR 低溫運輸和保存

線粒體膜電位檢測試劑盒(JC-1法)  50T|100T  單料緩沖蛋白胨水管  10ml*20支

線粒體膜電位檢測試劑盒(JC-10法)  100T  1mg 二硫鍵異構(gòu)，人 Disulfide Isomerase -70℃保存

Caspase-8活性測定試劑盒  20T|50T|100T  Caspase-8 Activity colorimetric assay Kit125mL Sodium Acetate Solution（乙酸鈉溶液）,3M,pH7.0   Sodium Acetate Solution,3M,pH7.0   常溫保存

Caspase-6活性測定試劑盒  20T|50T|100T  Caspase-6 Activity colorimetric assay Kit1 管 Rosetta(DE5)大腸桿菌  

Caspase-5活性測定試劑盒  20T|50T|100T  Caspase-5 Activity colorimetric assay Kit2 ug pRSET B pRSET B 低溫運輸，-20℃保存