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產(chǎn)品展示
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大鼠腎上皮細(xì)胞
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產(chǎn)品型號:
產(chǎn)品報(bào)價(jià):
產(chǎn)品特點(diǎn):
大鼠腎上皮細(xì)胞加入底物后請定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如,每隔10分鐘),如顏色較深,請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng),避免反應(yīng)過強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
  大鼠腎上皮細(xì)胞的詳細(xì)資料:

運(yùn)輸和保存:
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。

產(chǎn)品名稱

大鼠腎上皮細(xì)胞

英文名稱

Renal epithelial cells in rats

規(guī)格

5×105cells

培養(yǎng):
1.取出小鼠后瀝干酒精,放入超凈臺(tái)內(nèi),固定在泡沫板上。
2.用鑷子提起皮膚,用解剖剪剪開皮膚一個(gè)橫切口,將皮膚向上撕開,然后剪開肌肉等,暴露出腹腔,在左側(cè)找到脾臟,用彎頭眼科鑷取出脾臟,置于無菌培養(yǎng)皿中。
3.用生理鹽水將取出的脾臟清洗多次,并剔除多余無用的組織。
4.將篩網(wǎng)置于平皿中,脾臟置于篩網(wǎng)上,用彎頭鑷鑷住,輕輕在篩網(wǎng)上進(jìn)行碾磨,同時(shí)不停滴加不含血清的培養(yǎng)液沖洗。
5.將碾磨好的細(xì)胞懸液吸入至離心管中,離心(1000rpm,5min),吸去上清(去除血液等)。
6.加入10ml培養(yǎng)液,吹打混勻,取樣計(jì)數(shù)。
7.將稀釋好的細(xì)胞懸液分裝于培養(yǎng)瓶中,輕輕搖晃混勻,在培養(yǎng)瓶上。
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細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作流程:
1.1主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長至60%~70%融合時(shí),用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞,待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液,用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù),按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液=(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞,以0.25%胰酶消化成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞,加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) =計(jì)算貼壁率。 
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔,計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d,繪制細(xì)胞生長曲線。

hFOB1.19SV40轉(zhuǎn)染人成骨細(xì)胞1ml/T75

A-673人橫紋肌肉瘤細(xì)胞1ml/T75

HOS人骨肉瘤細(xì)胞1ml/T75

U-2OS人骨肉瘤細(xì)胞1ml/T75

MG-63人成骨肉瘤細(xì)胞1ml/T75

SHG-44人膠質(zhì)瘤細(xì)胞1ml/T75

A172人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞1ml/T75

U251人神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞1ml/T75

SK-N-SH人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞1ml/T75

SH-SY5Y人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞1ml/T75

SK-N-MC人神經(jīng)上皮瘤細(xì)胞1ml/T75

TJ905人膠質(zhì)瘤細(xì)胞1ml/T75

H4人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞1ml/T75

U-118 MG人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤1ml/T75

大鼠腎上皮細(xì)胞Mouse Anti-Rabbit IgM/FITC  FITC標(biāo)記的小鼠抗兔IgM 規(guī)格: 0.1mlBCHE (NT)  丁酰膽堿酯酶抗體(N端) 規(guī)格: 0.1ml

phospho-cardiac Troponin I(Thr143)  磷酸化心肌肌鈣蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlGoat Anti-Mouse IgM/Cy5  Cy5標(biāo)記的羊抗小鼠IgM 規(guī)格: 0.1ml

Anterior Gradient 2  前梯度同源蛋白2抗體 規(guī)格: 0.1mlPokemon  撲克蒙蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

LIPG/Endothelial lipase  內(nèi)皮脂肪酶抗體 規(guī)格: 0.2mlAdiponectin  脂聯(lián)素抗體 規(guī)格: 0.1ml

Cytosine deaminase  胞嘧啶脫氨酶抗體 0.2mlSIGLEC14  唾液酸結(jié)合性免疫球蛋白樣凝集素14抗體 規(guī)格: 0.2ml

Calretinin/CA  鈣結(jié)合蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlMURF3  肌肉特異性環(huán)指蛋白3抗體 規(guī)格: 0.2ml

RIP3  受體結(jié)合絲氨酸蘇氨酸激酶3抗體 規(guī)格: 0.2mlADAM20  去整合素樣金屬蛋白酶20抗體 規(guī)格: 0.2ml

G protein alpha S  G蛋白αS抗體(鳥嘌呤核苷酸結(jié)合蛋白Gα s) 規(guī)格: 0.2mlphospho-Bid(Ser61)  磷酸化BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

KLK11  激肽釋放酶11抗體 規(guī)格: 0.1mlIRF3  干擾素調(diào)節(jié)因子3 規(guī)格: 0.1ml

NADE/NGFRAP1  神經(jīng)生因子受體相關(guān)蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2mlMMS21/NSE2  E3連接酶MMS21蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

Kv4.3/KCND3  離子通道蛋白Kv4.3抗體 規(guī)格: 0.1mlMICS1  生激素誘導(dǎo)跨膜蛋白抗體(源性蛋白2) 規(guī)格: 0.2ml

FADD  Fas死亡結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白 規(guī)格: 0.1mlCobra poison Protein  眼鏡蛇蛇毒蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

NAP1L2  腦特異性蛋白BPX抗體 規(guī)格: 0.2mlHepatitis E Virus ORF3   戊型肝炎病毒抗體 規(guī)格: 0.1ml

Thymosin Alpha-1/PTMA  胸肽α1抗體 規(guī)格: 0.1mlCripto 1 monoclonal (CT)  畸胎瘤衍化生因子單克隆抗體(C端) 規(guī)格: 0.1ml

實(shí)驗(yàn)事項(xiàng):
1. 試劑準(zhǔn)備:所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫,使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實(shí)驗(yàn)操作中請使用一次性的吸頭,避免交叉污染。
2.   加樣:加樣或加試劑時(shí),請注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品,酶結(jié)合物或底物時(shí),前一個(gè)孔與后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大,將會(huì)導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育"時(shí)間,從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時(shí)間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育:為防止樣品蒸發(fā),試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,以避免液體蒸發(fā);洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作,任何時(shí)侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度。
4.   洗滌:洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干,勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水,同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指印,避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5.  試劑配制:Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時(shí)離心處理,以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用,并使用相應(yīng)的稀釋液配制,不能混淆。請確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液,盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時(shí),一次不要小于10μl),以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差;請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應(yīng)時(shí)間的控制:加入底物后請定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如,每隔10分鐘),如顏色較深,請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng),避免反應(yīng)過強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
7.  底物:底物請避光保存,在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
    建議檢測樣品時(shí)均設(shè)雙孔測定,以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
    如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高,請先稀釋后再測定,計(jì)算時(shí)請后乘以稀釋倍數(shù)。

產(chǎn)品相關(guān)關(guān)鍵字: 大鼠腎上皮細(xì)胞 5×105cells
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