操作規(guī)程 1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時. 2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。 3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。 4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。 6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。 7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。 8、結(jié)果分析 a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100 b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90) 中文名稱：Caspase 9熒光法檢測試劑盒(AFC) 英文名稱：Caspase-9 Fluorescence Metric Assay 產(chǎn)品規(guī)格：20T|50T|100T 產(chǎn)品貨號：BJ-01X6377 本試劑盒適用于培養(yǎng)細胞及新鮮組織Caspase-9 檢測。Caspase 家族在介導(dǎo)細胞凋亡的過程中起著非常重要的作用，其中Caspase-9 為關(guān)鍵的執(zhí)行分子，與DNA 斷裂、染色質(zhì)凝聚和凋亡小體形成有關(guān)。Caspase-9 在正常狀態(tài)下以酶原的形式存在于胞漿中，沒有活性；但在細胞發(fā)生凋亡階段，它被激活，活化的Caspase-9 由兩個大亞基和兩個小亞基組成，裂解相應(yīng)的胞漿胞核底物，終導(dǎo)致細胞凋亡。Caspase-9 熒光檢測試劑盒就是將Caspase-9 序列特異性的多肽偶聯(lián)至發(fā)色基團。當?shù)孜锉籆aspase-9 剪切后，發(fā)色基團即游離出來，可通過熒光酶標儀測定其熒光強度（激發(fā)波長=485nm,發(fā)射波長=535nm）。 注意事項 1. Caspase-9 Substrate 避光保存及使用。 2. 對某些凋亡誘導(dǎo)劑引起的細胞凋亡可能存在非依賴于Caspase-9 活化的機制，這種情況時利用本試劑盒檢測Caspase-9 活性無明顯改變，需要考慮凋亡機制中的其他信號通路。 3. 細胞數(shù)量需達到3～5×106 個或新鮮組織50~100mg，以便能達到測定需要的100～200μg 蛋白的要求，因為Caspase-9 的活性與細胞裂解液的蛋白含量有關(guān)，如測定的RFU 值偏低，可以通過適當延長反應(yīng)的時間，如果值還是不高，可通過增加細胞數(shù)量或組織量的方法來提高蛋白量。 |
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程： 一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備： 1） 準備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。 2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。 二． 細胞處理： 1） 復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。 2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
細胞培養(yǎng)方法： 1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代 ①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次； ②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化； ③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止； ④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清； ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基； ⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。 2、細胞復(fù)蘇： ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。 ②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。 3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種 ①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶） ②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化； ③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞； ④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。 Mycocentrospora acerina香菜腐爛病PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Yellow-Head Baculovirus(YBV)黃頭桿狀病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Dirofilaria immitis犬惡絲蟲（心絲蟲）LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Mycobacterium cheloei龜分枝桿探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Flos buddlejae密蒙花PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Acinetobacter baumannii鮑氏不動桿（鮑曼不動桿）LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Marek's Disease Virus(MDV)馬立克氏病病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Carnation Ringspot Virus(CRSV)康乃馨環(huán)駁病毒RT-PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 鵝源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Semen nelumbinis蓮子PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Fructus oryzae germinatus稻芽染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Rhizoma atractylodis macrocephalae 白術(shù)PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Caspase 9熒光法檢測試劑盒(AFC)通用型CMV（CYTOMEGALOVIRUS）病毒定性檢測試劑盒 20次 肉湯培養(yǎng)基A 英文名稱：Broth medium A(Casein soya bean digest broth) 產(chǎn)品規(guī)格：250g 細胞乙酰酯活性化學發(fā)光法定量檢測試劑盒 20次 干細胞成脂分化潛力定性染色試劑盒 20/100次 Helicobacter pylori RFLP基因分析試劑盒 20次 BCL2蛋白表達西方雜交分析試劑盒 5次 純化線粒體氧化應(yīng)激活性氧（ROS）初級熒光測定試劑盒 20次 哥倫比亞MUG培養(yǎng)基 英文名稱：Columbia- MUG Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g 組織對氧磷3（PON3）活性比色法定量檢測試劑盒 果蠅直接法PCR擴增試劑盒 50次 細胞還原型甘肽（GSH）濃度熒光定量檢測試劑盒 50次 |
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