操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

中文名稱：HSP90抑制劑(BIIB021)

英文名稱：BIIB021

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg

產(chǎn)品貨號(hào)：BJ-01X7847

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

甲基辛弗林鹽酸鹽

英文名：   4-hydroxyephedrine hydrochloride

英文別名：   DL-1-(4-Hydroxyphenyl)-2-methyl-2-methylaminoethanol hydrochloride

CAS登錄號(hào)：   7437-54-9

分子式：   C10H16ClNO2

異澤蘭黃素

英文名：   Eupatilin

英文別名：   2-(3,4-Dimethoxyphenyl)-5,7-dihydroxy-6-methoxychromen-4-one

CAS登錄號(hào)：   22368-21-4

分子式：   C18H16O7

棕矢車菊素

英文別名：   5,7-dihydroxy-2-(4-hydroxy-3-methoxy-phenyl)-6-methoxy-chromen-4-one

CAS登錄號(hào)：   18085-97-7

分子式：   C17H14O7

分子量：   330.29

芹菜苷

英文名：   Apioside

英文別名：   7-[(2-O-D-apio-beta-D-furanosyl-beta-D-glucopyranosyl)oxy]-5-hydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-4H-1-benzopyran-4-one

CAS登錄號(hào)：   26544-34-3

分子式：   C26H28O14

異芒果苷

英文名：   Isomangiferin

英文別名：   4-D-Glucopyranosyl-1,3,6,7-tetrahydroxy-9H-xanthen-9-one

CAS登錄號(hào)：   24699-16-9

分子式：   C19H18O11

甜茶苷

英文名：   Rubusoside

英文別名：   );(4alpha)-13-(beta-D-Glucopyranosyloxy)kaur-16-en-18-oic acid beta-D-glucopyranosyl ester

CAS登錄號(hào)：   64849-39-4

分子式：   C32H50O13

七葉皂苷B

英文名：   Escin IB

英文別名：   Aescin IB；22α-(Acetyloxy)-16α,24,28-trihydroxy-21β-[[(Z)-2-methyl-1-oxo-2-butenyl]oxy]oleana-12-ene-3β-yl 4-O-[2-O-(β-D-gluco-hexopyranosyl)-β-D-gluco-hexopyranosyl]-β-D-gluco-hexopyranosiduronic acid

CAS登錄號(hào)：   26339-90-2

分子式：   C55H86O24

七葉皂苷A

英文名：   Escin IA

英文別名：   Aescin IA

CAS登錄號(hào)：   123748-68-5

分子式：   C55H86O24

土槿皮甲酸

英文名：   Pseudolaric acid A

英文別名：   (2E,4E)-5-[(3R,4S,4aS,9aR)-4a-(Acetyloxy)-3,4,4a,5,6,9-hexahydro-3,7-dimethyl-1-oxo-1H-4,9a-ethanocyclohepta[c]pyran-3-yl]-2-methyl-2,4-pentadienoic acid

CAS登錄號(hào)：   82508-32-5

分子式：   C22H28O6

大豆皂苷Bb

英文名：   Soyasaponin BB

英文別名：   Soyasaponin I

CAS登錄號(hào)：   51330-27-9

分子式：   C48H78O18

單咖啡酰灑石酸

英文別名：   (2R,3R)-2-[[(E)-3-(3,4-Dihydroxyphenyl)-1-oxo-2-propenyl]oxy]-3-hydroxybutanedioic acid

CAS登錄號(hào)：   67879-58-7

分子式：   C13H12O9

分子量：   312.23

HSP90抑制劑(BIIB021)革蘭氏染液  100T  500U 限制性內(nèi)切MboI Restriction Endonuclease -20℃保存

堿性磷酸酶染液(偶氮偶聯(lián)法，適用于細(xì)胞樣本)  可染20-30張片  cALP Stain Kit1kit Protein Coupling Kit   Protein Coupling Kit   常溫保存

吉姆薩染色液  100ml  Giemsa Stain Solution1個(gè) 暗盒（8×10英寸） Cassette 室溫

活細(xì)胞核染料(紅)  500μL  100mL 甲酰胺 Formamide     4℃保存

核轉(zhuǎn)位分析試劑盒(單分子轉(zhuǎn)位)(FM法)  100T  50T 鉤端螺旋體PCR檢測(cè)試劑盒   低溫運(yùn)輸，-20℃保存

核轉(zhuǎn)位分析試劑盒(雙分子/多波長(zhǎng)轉(zhuǎn)位)(HCS法)  100T  100mg AMPPD AMPPD 4℃保存

線粒體細(xì)胞核轉(zhuǎn)位分析試劑盒(HCS法)  100T  2 ug T-Rex system T-Rex system 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

PluronicF-127  1g  10g 酸洗玻璃珠(直徑：200μm)  常溫

抗酒石酸酸性磷酸酶染液  20T  2 ug pAcAd5 CMVK-NpA  pAcAd5 CMVK-NpA  低溫運(yùn)輸，-20℃保存

快速瑞氏染液  250ml×3  含TSA平板  9cm*10/包

瑞氏-姬姆薩復(fù)合染液  250ml×3  1瓶 BGC-803細(xì)胞株 BGC-803 低溫運(yùn)輸和保存