培養(yǎng)操作步驟 ： 1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）； 3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時； 4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中； 5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。 產(chǎn)品參數(shù)： 中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品貨號 | 膠原酶IV型 | Collagenase IV | 100mg | BJ-01X6552 |
商品詳細介紹： 本品為IV型膠原酶，≥125 CDU/mg solid（CDU = collagen digestion units），特別適用于胰島組織的消化。 本品來源于溶組織梭菌（Clostridium histolyticum），是一種酶粗提物，不僅含有膠原酶（更準確的稱法為梭菌蛋白酶A（clostridiopeptidase A）），能夠降解天然膠原和網(wǎng)狀纖維。還含有其他的一些蛋白酶，多糖酶，脂酶等，分別能夠有效水解結(jié)締組織和上皮組織細胞外基質(zhì)內(nèi)的其他蛋白、多糖和脂質(zhì)，使得本品非常適用于組織消化。 膠原酶（Collagenase）是一種蛋白酶，一種肽鏈內(nèi)切酶，能夠特異性的識別Pro-X-Gly-Pro序列（該序列高頻率出現(xiàn)在膠原中，很少發(fā)現(xiàn)于其他蛋白中）并切割該序列中性氨基酸（X）和甘（Gly）之間的肽鍵。許多蛋白酶都能水解單鏈且變性的膠原多肽，但膠原酶是一種可以降解具有三股超螺旋結(jié)構(gòu)的天然膠原纖維的蛋白酶，這種膠原纖維廣泛存在結(jié)締組織內(nèi)。 目前商業(yè)化提供的細菌膠原酶主要根據(jù)膠原酶活性的差異，分為四種類型：膠原酶I型，II型，III型和IV型，在應用上有所偏向： 1）膠原酶I（Type I Collagenase）：含有比較均勻的各種酶活力（包括膠原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、活性）。通常用作上皮細胞、肝、肺、脂肪和腎上腺組織細胞的制備； 2）膠原酶II（Type II Collagenase）：含有更高的梭菌蛋白酶活性，通常用于心臟、骨、肌肉、胸腺和軟骨等組織來源細胞的制備； 3）膠原酶III（Type III Collagenase）：含有較低的蛋白酶活性，常用于乳腺細胞的制備； 4）膠原酶IV（Type IV Collagenase）：含有低活性，通常用于胰島細胞的制備，或者需要維持受體完整性的細胞制備實驗。 酶活力單位定義 在37℃，pH7.5 的條件下，5h內(nèi)水解膠原產(chǎn)生相當于1μM L-亮的酶量定義為1個酶活力單位。 儲存條件：4℃避光，有效期兩年 |
實驗報告： 一、分離與培養(yǎng)： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 
實驗要點及說明： 1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法； 2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理； 3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕； 4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率； 5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。 操作要點： 1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。 2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。 3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。 4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。 5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。 6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。 Mycoplasma fermentans發(fā)酵支原體探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Campylobacter colic結(jié)腸彎曲桿PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用） 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Avian Paramyxovirus 3(APMV)禽副粘病毒3型RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Radix trichosanthis天花粉染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Bovine Rhinitis A Virus (BRAV)牛鼻炎病毒A型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Ostertagia ostertagi奧斯特奧斯特線蟲LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Fructus litseae蓽澄茄PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Fructus citri香櫞染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Cortex meliae苦楝皮染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Bovine Viral Diarrhea Virus 2 (BVDV-2)牛病毒性腹瀉病毒2型RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Fructus sophorae槐角染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Riemerella anatipestifer鴨疫里默氏桿LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 膠原酶IV型Cary-Blair氏運送培養(yǎng)基管 英文名稱：Cary-Blair Transport Medium 產(chǎn)品規(guī)格：20支/包 人可溶性淀粉前體蛋白α(sAPPα)免疫試劑盒*直銷 Campy-Cefex瓊脂基礎 英文名稱：Campy-Cefex Agar Base 產(chǎn)品規(guī)格：250g 人核仁纖維蛋白抗體(AFA/snoRNP/U3RNP)免疫試劑盒進口、組裝 氯、碘中和劑管 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：9ml*20 人本周蛋白(BJP)免疫試劑盒進口、分裝 粉防己堿 ： 518-34-3 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢 人5羥基乙酸(5-HIAA)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應 小鼠乙酰(ACH)免疫試劑盒*直銷 牛雌二醇(E2)免疫試劑盒進口、分裝 小鼠基質(zhì)金屬蛋白抑制因子4(TIMP-4)免疫試劑盒進口、組裝
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