培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。 

產(chǎn)品參數(shù)：

商品詳細(xì)介紹：

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；

5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

(R型)原人參二醇

英文別名：   (R)Protopanaxdiol

CAS登錄號(hào)：   新品待定

分子式：   C30H52O3

分子量：   460

遼東楤木皂苷VII

英文名：   Araloside VII

英文別名：   Congmunoside VII

CAS登錄號(hào)：   340982-22-1

分子式：   C54H88O24

遼東楤木皂苷X

英文名：   Araloside X

英文別名：   Congmunoside X；3-O-{[β-D-glucopyranosyl(1→2)]-[ β-D-glucopyran osyl(1→3)-β-D-glucopyranosyl(1→3)] β-D-glucopyranosy l}hederagenin 28-O-β-D-glucopyranosyl ester

CAS登錄號(hào)：   344911-90-6

分子式：   C60H98O28

遼東楤木皂苷V

英文名：   Araloside V

英文別名：   Congmunoside V

CAS登錄號(hào)：   340963-86-2

分子式：   C54H88O23

白鮮堿

英文名：   Dictamnine

英文別名：   4-Methoxyfuro[2,3-b]quinoline

CAS登錄號(hào)：   484-29-7

分子式：   C12H9NO2

紫菀酮

英文別名：   2(1H)-Chrysenone,hexadecahydro-1,4b,6a,8,10a,12a-;hexamethyl-8-(4-methyl-3-pentenyl)-,(1R,4aS,4bS,6aS,8R,10aR,10bS,12aS)-;

CAS登錄號(hào)：   10376-48-4

分子式：   C30H50O

分子量：   426.72

石吊蘭甲素

英文名：   Lysionotin

CAS登錄號(hào)：   152743-19-6

分子式：   C18H16O7

分子量：   344

路路通酸

英文別名：   Betulinonic acid

CAS登錄號(hào)：   4481-62-3

分子式：   C30H46O3

分子量：   454.69

表木栓醇

英文名：   Epifriedelanol

英文別名：   Friedelin-3β-ol

CAS登錄號(hào)：   16844-71-6

分子式：   C30H52O

鴨腳樹葉堿

英文名：   2α,5α-Epoxy-1,2-dihydroakuammilan-17-oic acid methyl ester

英文別名：   Methyl (2alpha,5alpha,15alpha,16xi,19E)-1,2-dihydro-2,5-epoxyakuammilan-17-oate

CAS登錄號(hào)：   4684-32-6

分子式：   C20H22N2O3

山柰酚-3-O-蕓香糖苷

英文名：   Kaempferol-3-rutinoside

英文別名：   Nicotiflorin

CAS登錄號(hào)：   17650-84-9

分子式：   C27H30O15

FAK和ALK雙重抑制劑（CEP-37440）Rhodamine 123染色液  100T  氯化鈉素B肉湯基礎(chǔ)(SCPB) Sodium Chloride Polymyxin Broth Base 250g

吖啶橙染色液  100T  100g 鹽酸胍 Guanidine Hydrochloride   4℃密封干燥保存

臺(tái)盼藍(lán)染色液  100T  1%TTC溶液  1ml/支*5

中性紅染色液  50ml  1mL 秋水仙素溶液 Colchicine Solution 常溫保存

蘇木素伊紅染色試劑盒  200ml  2 ug pBlueScript SK（-） pBlueScript SK（-） 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

TRAP染色試劑盒  30T  100g DNCTAB(十六烷基基)  

革蘭氏染色試劑盒  200ml  2 ug pGEX-20T pGEX-20T 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

瑞氏染色試劑盒  100ml|500ml  1%聚酯80-玉米瓊脂培養(yǎng)基 1%Tween 80-Corn Agar Medium 250g

姬姆薩染色試劑盒  80ml|700ml  1瓶 CCC-HEK-1細(xì)胞株 CCC-HEK-1 低溫運(yùn)輸和保存

亞甲基藍(lán)染色試劑盒  100ml  腸球菌顯色培養(yǎng)基  1000ml

酸性磷酸酶染色試劑盒  30T  1mL EDTA溶液，0.2M EDTA Solution -20℃保存