操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

中文名稱：HMG-CoA還原酶（HMGCR）抑制劑(Mevastatin)

英文名稱：Mevastatin

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|10mg|50mg

產(chǎn)品貨號(hào)：BJ-01X7854

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

丹酚酸D

英文名：   Salvianolic acid D

英文別名：   (alphaR)-alpha-[[(2E)-3-[2-(Carboxymethyl)-3,4-dihydroxyphenyl]-1-oxo-2-propen-1-yl]oxy]-3,4-dihydroxybenzenepropanoic acid

CAS登錄號(hào)：   142998-47-8

分子式：   C20H18O10

丹酚酸C

英文名：   Salvianolic acid C

英文別名：   (alphaR)-alpha-[[(2E)-3-[2-(3,4-Dihydroxyphenyl)-7-hydroxy-4-benzofuranyl]-1-oxo-2-propen-1-yl]oxy]-3,4-dihydroxybenzenepropanoic acid

CAS登錄號(hào)：   115841-09-3

分子式：   C26H20O10

三七皂苷R2(R型)

CAS登錄號(hào)：   新品待定

分子式：   C41H69O13

分子量：   871.01

分子結(jié)構(gòu)：     

三七皂苷Ft1

CAS登錄號(hào)：   新品待定

分子式：   C47H80O17

分子量：   917.13

分子結(jié)構(gòu)：     

苯甲酰次烏頭原堿

英文別名：   Benzoylhypaconine

CAS登錄號(hào)：   63238-66-4

分子式：   C31H43NO9

分子量：   573.29

次烏頭原堿

CAS登錄號(hào)：   新品待定

分子式：   C24H39NO8

分子量：   469.57

分子結(jié)構(gòu)：     

新烏頭原堿

CAS登錄號(hào)：   6792-09-2

分子式：   C24H39NO9

分子量：   485.57

分子結(jié)構(gòu)：     

28-去甲基-β-香樹脂酮

CAS登錄號(hào)：   新品待定

分子式：   C29H46O

分子量：   410.67

分子結(jié)構(gòu)：     

長(zhǎng)春瑞濱

英文名：   Vinorelbine

英文別名：   5-Noranhydrovinblastine； NVB；Kw-2307；(2β,3β,4β,5α,12R,19α)-4-(Acetyloxy)-6,7-didehydro-15-[(2R,6R,8S)-4-ethyl-1,3,6,7,8,9-hexahydro-8-(methoxycarbonyl)-2,6-methano-2H-azecino[4,3-b]indol-8-yl]-3-hydroxy-16-methoxy-1-methyl-aspidospermidine-3-carboxylic acid, methyl ester

CAS登錄號(hào)：   71486-22-1

分子式：   C45H54N4O8

長(zhǎng)春新堿

英文別名：   22-oxo-vincaleukoblastine

CAS登錄號(hào)：   57-22-7

分子式：   C46H56N4O10

分子量：   824.96

酒石酸長(zhǎng)春質(zhì)堿

英文別名：   ;(2alpha,5beta,6alpha,18beta)-3,4-Didehydroibogamine-18-carboxylic acid methyl ester (2R,3R)-2,3-dihydroxybutanedioate

CAS登錄號(hào)：   4168-17-6

分子式：   C25H30N2O8

分子量：   486.51

HMG-CoA還原酶（HMGCR）抑制劑(Mevastatin)線粒體超氧化物染色試劑盒-M13  30T|50T  2 ug pFastBac1-Gus pFastBac1-Gus 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)染色試劑盒(藍(lán)色熒光)  125T|250T  沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（SDA）（2015藥典） Sabouraud Dextrose Agar 250g

高爾基體G01綠色熒光染色試劑盒  30T  1瓶 C6細(xì)胞株 C6 低溫運(yùn)輸和保存

溶酶體染色試劑盒(綠色熒光)-L01  250T|500T  大腸桿菌／大腸菌群顯色培養(yǎng)基(第二代) E.Coli/Coliform Chromogenic Medium 1000(ML)

溶酶體染色試劑盒(紅色熒光)-L03  500T|1000T  300U T7 DNA 聚合(未修飾) T7 DNA Polymerase（unmodified） -20℃保存

溶酶體染色試劑盒(黃色/藍(lán)色熒光)-L05  125T|250T  500mL Phosphate Buffer，0.2M, pH6.8   Phosphate Buffer，0.2M, pH6.8   常溫保存

細(xì)胞質(zhì)染色試劑盒-C01  500T  0.1mL×10 BL21(DE3)pLysS化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 BL21 (DE3) pLysS Competent Cell -80℃保存

Ca2+鈣離子染色試劑盒(Fluo-3,AM法)  50T|100T  250mL MOPS Buffer,1.0M,pH7.0   MOPS Buffer,1.0M,pH7.0   常溫保存

細(xì)胞膜染色試劑盒(綠色熒光)-M01  1000T|5000T  1/2MS培養(yǎng)基 1/2MS Medium 250g

細(xì)胞膜染色試劑盒(橙色熒光)-M03  1000T|5000T  1瓶 U-2 OS-Luc teT-on細(xì)胞株 U-2 OS-Luc teT-on 低溫運(yùn)輸和保存

細(xì)胞骨架染色試劑盒-C12  500T  M-肉湯 M-Broth 250g