操作規(guī)程 1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時. 2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。 3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。 4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。 6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。 7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。 8、結(jié)果分析 a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100 b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90) 中文名稱：Percoll 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：100ml 產(chǎn)品貨號：BJ-01X6547 Percoll是一種適用性廣且操作靈活簡單的低密度梯度分離液，可用來分離細胞，亞細胞顆粒，細菌，病毒，甚至實現(xiàn)受損細胞及其碎片與完整活細胞的分離。Percoll主要由表面包被單層乙烯烷酮（PVP）的硅膠顆粒組成，直徑15-30 nm，游離PVP的含量僅占1-2%。由于顆粒大小的異質(zhì)化，離心過程以不同的速率沉淀，自發(fā)產(chǎn)生一個勻質(zhì)化且等滲的梯度，密度在1.0-1.3 g/ml之間。大部分沉淀系數(shù)＞60S的生物顆粒都可以用Percoll實現(xiàn)分離。 本品是無菌的溶液，呈無色至淺黃色，具有以下幾大特點， 1）Percoll形成的梯度密度范圍在1.0-1.3 g/ml之間，整個梯度體系都是等滲的； 2）無細胞毒性，化學惰性，不會粘附到細胞膜上； 3）可調(diào)節(jié)至生理離子強度和pH； 4）溫和條件分離細胞，亞細胞顆粒和較大病毒（低至~70S），可保持其活力和形態(tài)完整性； 5）只需角轉(zhuǎn)頭中速離心即可實現(xiàn)預(yù)成梯度或者自發(fā)形成梯度分離； 6）Percoll粘度低（10±5 cP at 20℃），能夠快速形成梯度和顆粒分離；采用預(yù)制梯度分離低速離心力（200-1000×g）僅需數(shù)分至數(shù)十分鐘即可達到滿意的分離結(jié)果； 7）Percoll穩(wěn)定性高，未開封的產(chǎn)品室溫保存5年有效；開封的產(chǎn)品室溫無菌保存至少2年有效； 8）Percoll（未稀釋）可重新高壓滅菌，120℃，30min； 儲存條件：4-30℃，有效期5年 |
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程： 一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備： 1） 準備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。 2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。 二． 細胞處理： 1） 復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。 2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
細胞培養(yǎng)方法： 1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代 ①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次； ②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化； ③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止； ④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清； ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基； ⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。 2、細胞復(fù)蘇： ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。 ②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。 3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種 ①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶） ②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化； ③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞； ④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。 Human Parainfluenza Virus 4A(HPIV-4A)人副流感病毒4A型染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Varicella-Zoster Virus(VZV)水痘-帶狀皰疹病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 West Nile Virus(WNV)西尼羅病毒RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Meta肺炎病毒RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Paravaccinia Virus副牛痘病毒RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Alder yellows phytoplasma榿樹黃化植原體PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Blastocystis spp.芽囊原蟲通用LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Rickettsia prowazekii普氏立克次氏體LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Fructus litseae蓽澄茄探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Gallid Herpesvirus 2禽皰疹病毒2型LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Herba taraxaci蒲公英LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Avian Infectious Bronchitis Virus(AIBV)禽傳染性支氣管炎病毒荷蘭株RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Percoll海獅三碘甲狀腺原(T3)免疫試劑盒*直銷 人皮質(zhì)類固醇結(jié)合球蛋白(CBG)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 6.5%NaCl葡萄糖瓊脂 英文名稱：6.5% NaCl Dextrose Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g 人抗核周因子(APF)抗體免疫試劑盒*直銷 馬尿酸鈉（軍團菌） 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：20支/盒 人泛素激活(E1/UBAE)免疫試劑盒進口、組裝 white培養(yǎng)基 英文名稱：White Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g 人Toll樣受體9(TLR-9/CD289)免疫試劑盒進口、分裝 豬內(nèi)皮素1(ET-1)免疫試劑盒進口、分裝 犬骨成型蛋白2(BMP-2)免疫試劑盒*直銷 小鼠腎損傷分子1(Kim-1)免疫試劑盒*直銷 |
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