操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

中文名稱：木栓化細(xì)胞壁染色液(蘇丹染色法)

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：50ml

產(chǎn)品貨號：BJ-01X6983

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

Rochambeau病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周EXTL  外生性骨疣樣蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml

Bursaphelenchus xylophilus松材線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周Rabbit Anti-Bov IgG/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗牛IgG  規(guī)格: 0.1ml

麝源性成分染料法熒光定量PCR試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周RSL1D1  細(xì)胞衰老抑制基因蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlMouse Anti-Bov IgG/APC  APC標(biāo)記的小鼠抗牛IgG 規(guī)格: 0.1ml

Tick-borne Hemorrhagic Fever Virus(TBHFV)蜱傳出血熱病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周PYGM  肌肉糖原磷酸化抗體 規(guī)格: 0.2mlSCF  干細(xì)胞生因子抗體 規(guī)格: 0.1ml

Onion Yellow Dwarf Virus(OYDV)洋蔥黃矮病毒RT-PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周MAGE-1  黑色素瘤相關(guān)抗原抗體 規(guī)格: 0.1mlphospho-MEF2C(Thr300)  磷酸化肌細(xì)胞增強因子2C抗體 規(guī)格: 0.1ml

Rhizoma cibotii狗脊PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周phospho-Kidins220 (Ser918)  磷酸化220kDa蛋白激D相互作用蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlDonkey Anti-human IgG/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標(biāo)記的驢抗人IgG 規(guī)格: 0.1ml

Human Immunodeficiency Virus 1(HIV-1M-H)人免疫缺陷病毒1型M群H型RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周DNase I  脫氧核糖核酸1抗體 規(guī)格: 0.2mlTPD52L1/D53  瘤蛋白D53抗體 規(guī)格: 0.2ml

Cladosporium carrionii卡氏枝孢霉探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周KLF9/BTEB1  轉(zhuǎn)錄因子KLF9抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-Stat2 (Tyr690)  磷酸化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子2抗體 規(guī)格: 0.1ml

Semen ziziphi spinosae酸棗仁染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周PDLIM3/ALP  輔肌動蛋白相關(guān)LIM蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlFAM81A  FAM81A蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

Riemerella anatipestifer鴨疫里默氏桿LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周IDH3A  草酰琥珀酸脫羧α抗體 規(guī)格: 0.2mlPhospho-mu Opioid Receptor (Ser375)  磷酸化µ-型片受體抗體 規(guī)格: 0.1ml

木栓化細(xì)胞壁染色液(蘇丹染色法)卵黃培養(yǎng)基基礎(chǔ) 英文名稱：Egg-Yolk Mannitol Salt agar Base 產(chǎn)品規(guī)格：250g

人抗白蛋白抗體(AAA)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

大豆酪蛋白瓊脂（TSA）培養(yǎng)基平板9cm 英文名稱：TSA 產(chǎn)品規(guī)格：10個/包

人端粒(TE)免疫試劑盒*直銷

明膠 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：20支

人S100鈣結(jié)合蛋白A6/鈣粒蛋白A(S100A6)免疫試劑盒進口、組裝

豬極低密度脂蛋白(VLDL)免疫試劑盒進口、組裝

犬白介素15(IL15)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

小鼠熱休克蛋白70(HSP-70)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

雞血小板因子4(PF-4/CXCL4)免疫試劑盒進口、組裝

小鼠白介素33(IL-33)免疫試劑盒*直銷