細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

中文名稱：AFIP甲酸-檸檬酸液

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：2×500ml

產(chǎn)品貨號：BJ-01X6787

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

Avian Leukosis Virus(ALV)禽白血病病毒F亞群RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周phospho-ATG16A(Ser213)  磷酸化自噬相關(guān)蛋白16A抗體 規(guī)格: 0.1mlDNAPK/PRKDC  DNA依賴蛋白激催化亞基抗體 規(guī)格: 0.2ml

Pigeon Pox Virus(PPV)鴿痘病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Mouse Anti-Goat IgG/APC  APC標(biāo)記的小鼠抗羊IgG 規(guī)格: 0.1mlRabbit Anti-human IgM/PE-CY5  PE-CY5標(biāo)記的兔抗人IgM 規(guī)格: 0.1ml

Placenta hominis紫河車染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周CD109  轉(zhuǎn)化生因子β1結(jié)合蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlC4orf44  4號染色體開放閱讀框44抗體 規(guī)格: 0.2ml

Paracoccidioides brasiliensis巴西副球孢子LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周PSMD7  蛋白調(diào)解因子7抗體 規(guī)格: 0.2mlPhospho-Smad1(Ser206)  磷酸化細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子Smad-1抗體 規(guī)格: 0.1ml

Dactylogyrus spp.指環(huán)蟲屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周SCHAD/HADHSC  短鏈L-3羥烷基輔A脫抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-CstF64(Ser498)  磷酸化細(xì)胞分裂相關(guān)蛋白CSTF64抗體 規(guī)格: 0.1ml

Radix scutellariae黃芩LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周NSP1/SH2D3A  SH2結(jié)構(gòu)域蛋白3A抗體 規(guī)格: 0.2mlC9orf86  9號染色體開放閱讀框86抗體 規(guī)格: 0.2ml

Mycobacterium cheloei龜分枝桿LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Mouse anti-rabbit IgG ascites  小鼠抗兔IgG腹水 規(guī)格: 1mlHCV-NS3  丙型毒-NS3抗體 規(guī)格: 0.1ml

Erysipelothrix spp丹毒絲屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周ITIH4  α胰蛋白重鏈H4抗體 規(guī)格: 0.2mlCOPS2/TRIP15  甲狀受體相互作用蛋白15抗體 規(guī)格: 0.2ml

Fructus evodiae吳茱萸探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周SH2B1  SH2B蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlCARD7/NALP1  凋亡加強結(jié)構(gòu)域蛋白7抗體 規(guī)格: 0.2ml

致瀉性大腸埃希氏五重染料法熒光定量PCR試劑盒（停） 動物病原微生物檢測（科研用） 50次 低溫 負(fù)20度 一年 4周Rabbit Anti-Monkey IgG/PE-Cy7  PE-Cy7標(biāo)記的兔抗猴IgG 規(guī)格: 0.1mlEXPB-2  植物延展素-β 規(guī)格: 1ml

AFIP甲酸-檸檬酸液大鼠前列腺酸性(PAP)免疫試劑盒*直銷

山羊β內(nèi)啡肽(β-EP)免疫試劑盒*直銷

大鼠釋放激素受體(GnRHR)免疫試劑盒進口、組裝

人細(xì)胞間粘附分子3(ICAM-3/CD50)免疫試劑盒進口、分裝

魚胰島素受體(ISR)免疫試劑盒*直銷

人內(nèi)皮素1(ET-1)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

葡萄糖銨培養(yǎng)基 英文名稱：Ammonium Dextrose Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g

人抗BB抗體(BB-Ab)免疫試劑盒*直銷

酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（YPD） 英文名稱：Yeast Peptone Dextrose Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g

人低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白4(LRP-4)免疫試劑盒進口、組裝

乳酸菌成套生化鑒定管 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：11種/盒*5